城市降雨徑流中含多種污染物，其中有機物多環(huán)芳烴（PAHs）具有極強生物毒性，常積累于路邊滯留池中，產(chǎn)生持久的生態(tài)風險。研究者構建了一種高效降解PAHs的工程菌用于生態(tài)修復。
（1）生態(tài)修復效果除受工程菌的降解能力限制外，還與工程菌和本地微生物之間的

競爭

競爭

等有關。研究者調(diào)研滯留池中PAHs種類，發(fā)現(xiàn)以芘為主。將滯留池土壤溶液接種于添加芘的培養(yǎng)基中，篩選獲得三種菌株，再分別接種于芘作唯一碳源的培養(yǎng)基中，均無法形成菌落，說明三者均對芘有一定的

耐受性

耐受性

，但無法降解芘。最終篩選獲得基因工程改造的受體菌。
（2）將控制高效降解PAHs的RHD基因與綠色熒光蛋白基因（CFP基因）融合后構建重組質(zhì)粒，導入受體菌獲得工程菌。分別提取工程菌的擬核DNA與質(zhì)粒，PCR結果如圖1，可知目的基因

從重組質(zhì)粒整合至擬核DNA

從重組質(zhì)粒整合至擬核DNA

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（3）將工程菌培養(yǎng)在以芘為唯一碳源的培養(yǎng)基中，檢測熒光強度及芘含量隨時間的變化，結果如圖2。
據(jù)圖可知，熒光強度可作為工程菌降解芘的指標，依據(jù)是

隨著重組菌中的熒光強度增高，培養(yǎng)基中芘含量不斷下降

隨著重組菌中的熒光強度增高，培養(yǎng)基中芘含量不斷下降

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（4）工程菌在特定條件下自毀可降低生態(tài)風險。利用以下材料，提出可自毀的工程菌的設計思路。
T質(zhì)粒，核酸水解酶基因（nuc基因），lac啟動子，IPTG（可誘導lac啟動子啟動轉(zhuǎn)錄）

利用lac啟動子及nuc基因與T質(zhì)粒構建重組載體，導入工程菌，需要時進行IPTG誘導，引發(fā)自毀

利用lac啟動子及nuc基因與T質(zhì)粒構建重組載體，導入工程菌，需要時進行IPTG誘導，引發(fā)自毀

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（5）后續(xù)評價了可自毀工程菌對微生物群落結構的影響。綜合上述研究，完善技術路線圖。

微生物群落結構→基因工程菌→安全性

微生物群落結構→基因工程菌→安全性

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