通常真核細胞翻譯的起始必須依賴于mRNA的5′端帽子結構，而內部核糖體進入位點（IRES）則是位于mRNA內部的核糖體識別、結合序列，IRES使翻譯可以從mRNA內部開始。人溶菌酶和人乳鐵蛋白是人乳中重要的抗菌蛋白，科研人員構建人溶菌酶基因（hLYZ）和人乳鐵蛋白基因（hLTF）雙基因表達載體，并獲得轉基因牛胚胎。如圖表示雙基因表達載體的主要構建過程，請回答下列問題。
（1）IRES的基本單位是
核糖核苷酸
核糖核苷酸
，翻譯時核糖體在mRNA移動方向是 5'→3'
5'→3'
（5′→3′或3′→5′）。與兩個基因直接連接形成融合基因相比，兩個基因之間插入IRES序列的意義是 便于得到兩種具有一定功能的蛋白質
便于得到兩種具有一定功能的蛋白質
。
（2）為實現(xiàn)hLTF與IRES序列的連接，在PCR擴增基因片段時通常在引物的5′端添加特定的限制酶識別序列，而不在3′端添加的原因是 使引物的3'端與模板鏈嚴格互補配對，保證子鏈的延伸
使引物的3'端與模板鏈嚴格互補配對，保證子鏈的延伸
。
（3）過程①中，用 XbaⅠ和NheⅠ
XbaⅠ和NheⅠ
切割質粒a、b后，再用 電泳法
電泳法
（方法）分離，收集質粒a的hLTF片段，與質粒b的大片段連接，獲得重組質粒1。
（4）過程②中，用BamHⅠ分別處理重組質粒1和質粒c,再連接形成的重組質粒不止一種，這是因為 目的基因與質粒c存在正反連接、目的基因多拷貝與質粒c連接等
目的基因與質粒c存在正反連接、目的基因多拷貝與質粒c連接等
。用BamHⅠ對重組質粒2進行酶切，獲得的DNA片段大小為 3.2kb和8.2kb
3.2kb和8.2kb
。
（5）科研人員以包含重組質粒2的脂質體轉染乳腺上皮細胞時，在細胞培養(yǎng)液中加入一定濃度的新霉素的主要目的是 便于篩選導入重組質粒2的牛乳腺上皮細胞
便于篩選導入重組質粒2的牛乳腺上皮細胞
。選擇乳腺上皮細胞作為受體細胞便于檢測 hLYZ和hLTF能否表達
hLYZ和hLTF能否表達
。
（6）研究人員試圖以轉hLYZ與hLTF的奶牛乳腺上皮細胞作為供體細胞，培養(yǎng)轉基因克隆胚胎，在此過程中主要涉及的現(xiàn)代生物技術有 體細胞核移植技術、動物細胞培養(yǎng)技術、早期胚胎培養(yǎng)技術
體細胞核移植技術、動物細胞培養(yǎng)技術、早期胚胎培養(yǎng)技術
。
