某科研小組通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將黑麥草的抗旱基因 P 轉(zhuǎn)入野生型擬南芥，以驗(yàn)證基因P 的功能，其流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：

（1）從黑麥草的DNA中分離出目的基因 P，利用

PCR

PCR

技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。
（2）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時，用不同類型的限制酶切割 DNA 后，可能產(chǎn)生平末端，也可能產(chǎn)生

黏性

黏性

末端。圖中①表示

重組質(zhì)粒（重組DNA分子）

重組質(zhì)粒（重組DNA分子）

，在形成①時，可用兩種不同的限制酶分別對含有基因 P 的 DNA 和質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，與該方法相比，單酶切的缺點(diǎn)是容易造成基因 P 或質(zhì)粒自身環(huán)化、

基因P和質(zhì)粒反向連接

基因P和質(zhì)粒反向連接

。在圖中感染操作前需將農(nóng)桿菌接種于含青霉素的 LB 培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其目的是

篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌（篩選含有質(zhì)粒的農(nóng)桿菌）

篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌（篩選含有質(zhì)粒的農(nóng)桿菌）

。
（3）取擬南芥葉肉細(xì)胞脫分化得到愈傷組織，誘導(dǎo)愈傷組織直接發(fā)育成花器官，屬于植物組培中的

器官發(fā)生

器官發(fā)生

途徑。將擬南芥的花序浸入農(nóng)桿菌懸液以實(shí)現(xiàn)

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

。
（4）將不同來源的遺傳物質(zhì)重新組合，除圖示外還可以是顯微注射及

細(xì)胞融合

細(xì)胞融合

。