基因工程自20世紀(jì)70年代興起后，在短短的30年間，得到了飛速的發(fā)展，目前已成為生物科學(xué)的核心技術(shù)?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蛑饕ㄋ膫€步驟：
（1）目的基因的獲取：
①如果目的基因的核苷酸序列是已知的，可用化學(xué)合成法化學(xué)合成法合成目的基因，或者用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因；
②如果目的基因的核苷酸序列是未知的，可以建立一個包括該種生物所有基因的基因組文庫，或者通過逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄方法建立cDNA文庫。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：
①對于遺傳背景未知的生物，可提取該生物的基因組DNA，用多種限制限制酶切割成各種不同DNA片段，分別導(dǎo)入大腸桿菌（如圖所示）。由于切割后的基因片段大小不一，有的片段可能含有多個基因，不宜直接導(dǎo)入表達(dá)載體，所以可以先將它們分別與克隆質(zhì)粒（如PBR322）連接構(gòu)建重組載體，利用加入氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選得到多個大腸桿菌菌落，不同的菌落中含有相同或不同相同或不同（“相同”、“不同”、“相同或不同”）的基因。將轉(zhuǎn)移到纖維素膜上的細(xì)菌裂解，釋放出DNA，利用分子雜交技術(shù)檢測目的基因，依據(jù)圖示雜交帶，可進(jìn)一步選取bb菌落（填寫圖中字母）繼續(xù)培養(yǎng)，從而獲得含有目的基因的受體菌。再將獲得的目的基因與相應(yīng)的質(zhì)粒（如pET）連接構(gòu)建表達(dá)載體，pET質(zhì)粒含有卡那霉素抗性基因、復(fù)制原點(diǎn)外，還必須有啟動子和終止子啟動子和終止子，以利于DNA片段在受體細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。
②與上述方法相比，通過cDNA文庫獲取的目的基因，可直接與pET質(zhì)粒連接構(gòu)建表達(dá)載體，理由是cDNA片段較小cDNA片段較小。
（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：
如果目的基因來自真核細(xì)胞的基因組DNA序列，轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞一般不能為大腸桿菌，若目的基因來自cDNA文庫，則受體細(xì)胞可不受限制，原因是cDNA序列無內(nèi)含子，真核細(xì)胞基因序列中含有內(nèi)含子，大腸桿菌等原核細(xì)胞無法對內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄片段進(jìn)行剪切修飾cDNA序列無內(nèi)含子，真核細(xì)胞基因序列中含有內(nèi)含子，大腸桿菌等原核細(xì)胞無法對內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄片段進(jìn)行剪切修飾。
（4）目的基因的檢測與鑒定：
導(dǎo)入受體細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，需要通過分子水平檢測和個體生物學(xué)水平鑒定。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】化學(xué)合成法；逆轉(zhuǎn)錄；限制；氨芐青霉素；相同或不同；b；啟動子和終止子；cDNA片段較??；cDNA序列無內(nèi)含子，真核細(xì)胞基因序列中含有內(nèi)含子，大腸桿菌等原核細(xì)胞無法對內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄片段進(jìn)行剪切修飾
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：13引用：2難度：0.7
相似題
-
1．科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達(dá)產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細(xì)胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細(xì)胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴(kuò)增該cDNA時(shí)的兩個引物對應(yīng)的局部序列（前10個堿基序列），并標(biāo)明5'和3'端：，。一個初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進(jìn)轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
2．基因工程技術(shù)又稱為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時(shí)構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達(dá)載體中，啟動子是聚合酶識別并結(jié)合的部位．若采用原核生物作為基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí)，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
3．基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細(xì)胞，科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對干擾素基因缺失的小鼠進(jìn)行了基因治療．請回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入基因表達(dá)載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細(xì)胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體DNA分子上，再將能正常表達(dá)干擾素的細(xì)胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導(dǎo)入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細(xì)菌導(dǎo)致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細(xì)胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正常基因?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，以表達(dá)出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進(jìn)行互補(bǔ)結(jié)合，來阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類是編碼可以殺死癌細(xì)胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
把好題分享給你的好友吧~~