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心腦血管疾病引發(fā)的血栓并發(fā)癥嚴(yán)重威脅人類生命,居各種疾病死亡率首位。臨床上常用組織型纖溶酶原激活劑作為溶解血栓、搶救心肌梗死患者的特效藥。然而,t-PA因注射劑量大容易誘發(fā)顱內(nèi)出血,為了提高t-PA臨床應(yīng)用的可行性,科學(xué)家研發(fā)了一種顱內(nèi)出血傾向大幅度降低的優(yōu)質(zhì)t-PA突變蛋白。據(jù)此回答下列問題:
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(1)人t-PA由527個(gè)氨基酸構(gòu)成(如下圖所示),基礎(chǔ)研究顯示,將t-PA第84位的半胱氨酸替換為絲氨酸,所形成的突變蛋白溶解血栓有效性明顯提高。對(duì)t-PA的改造必須通過
基因修飾(或基因合成)
基因修飾(或基因合成)
獲得t-PA突變基因而不是直接改造蛋白質(zhì)。
(2)t-PA突變基因最終需要與P質(zhì)粒重組才能構(gòu)建基因表達(dá)載體。P質(zhì)粒DNA分子上有①?gòu)?fù)制原點(diǎn),可以保證B質(zhì)粒在受體細(xì)胞中能
自我復(fù)制
自我復(fù)制
;②多個(gè)限制酶切位點(diǎn),便于
目的基因(外源DNA)的插入
目的基因(外源DNA)的插入
;③標(biāo)記基因和相關(guān)的啟動(dòng)子。
(3)基因表達(dá)載體進(jìn)入受體細(xì)胞中并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為
轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化
。
(4)為檢測(cè)t-PA基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞,可采用
DNA分子雜交
DNA分子雜交
進(jìn)行檢測(cè)。除此之外,還可以使用PCR技術(shù),實(shí)驗(yàn)組以待測(cè)樣本DNA為模板,使用引物1:5′-TACCAAGTGATCTGCAGA-3′、引物2:
5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’
5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’
(填引物的核苷酸序列)進(jìn)行PCR擴(kuò)增;同時(shí)以
以t-PA突變基因片段為模板
以t-PA突變基因片段為模板
模板的組別作為陰性對(duì)照組。若
實(shí)驗(yàn)組與陽性對(duì)照組的結(jié)果一致,且陰性對(duì)照組無擴(kuò)增產(chǎn)物
實(shí)驗(yàn)組與陽性對(duì)照組的結(jié)果一致,且陰性對(duì)照組無擴(kuò)增產(chǎn)物
,說明目的基因?qū)氤晒Α?/h1>

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合
【答案】基因修飾(或基因合成);自我復(fù)制;目的基因(外源DNA)的插入;轉(zhuǎn)化;DNA分子雜交;5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’;以t-PA突變基因片段為模板;實(shí)驗(yàn)組與陽性對(duì)照組的結(jié)果一致,且陰性對(duì)照組無擴(kuò)增產(chǎn)物
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:6引用:1難度:0.6
相似題
  • 1.某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列,并運(yùn)用交錯(cuò)延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強(qiáng)的重組B基因,轉(zhuǎn)入煙草獲得成功,過程如圖所示。下列選項(xiàng)正確的是(  )
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    注:①交錯(cuò)延伸PCR:基因Bt1和Bt2均作為模板,所需引物相同,圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動(dòng)子Pr1a可在煙草葉肉細(xì)胞中特異性啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長(zhǎng)素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段,可使植物細(xì)胞合成生長(zhǎng)素。

    發(fā)布:2024/11/16 21:0:1組卷:36引用:2難度:0.5
  • 2.基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速,如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是( ?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布:2024/11/14 7:0:1組卷:62引用:7難度:0.7
  • 3.經(jīng)由食物攝取過量生物胺會(huì)引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng),嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命,因此必須對(duì)食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶(MCO)能高效分解生物胺,基于基因工程規(guī)?;a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國(guó)科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因,然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
    (1)通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物,涉及如下步驟,則合理的操作步驟排序是
     
    (填寫下列編號(hào))。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?;a(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
    (2)在PCR過程中,引物的功能是
     
    。
    A.啟動(dòng)DNA復(fù)制
    B.規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
    C.解旋DNA雙鏈
    D.充當(dāng)復(fù)制模板
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    (3)為獲得目的基因MCO(圖甲灰色表示的序列),正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    (4)獲取目的基因后,需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    (填DNA或RNA/DNA或RNA)。
    (5)在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中,溫度隨時(shí)間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    (6)若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端,那么載體質(zhì)粒pCLY15(圖丙中圖1)需用
     
     
    切開,才能與MCO片段高效連接。
    (7)下列實(shí)驗(yàn)操作中,能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     

    A.從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA,用合適的限制酶切割
    B.在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑,以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
    C.從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA,以此為模板進(jìn)行PCR檢測(cè)
    D.將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc(四環(huán)素)的平板上,根據(jù)大腸桿菌生長(zhǎng)與否加以鑒別

    發(fā)布:2024/11/14 4:30:2組卷:29引用:3難度:0.5
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