將外源多酚氧化酶基因（POT33）的同源片段與載體結(jié)合，構(gòu)建反義表達(dá)載體，通過(guò)基因工程技術(shù)導(dǎo)入馬鈴薯，產(chǎn)生的反義RNA可有效降低馬鈴薯內(nèi)源多酚氧化酶基因的表達(dá)水平，從而改善薯塊的損傷褐化現(xiàn)象，提高馬鈴薯的食用和加工品質(zhì)?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問(wèn)題：
（1）獲取馬鈴薯POT33基因的同源片段：根據(jù)馬鈴薯POT33基因的

核苷酸的排列順序

核苷酸的排列順序

設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，在引物的5′端加入限制性內(nèi)切核酸酶的

識(shí)別序列

識(shí)別序列

以滿足目的基因連接到載體的需要，再通過(guò)PCR獲取馬鈴薯POT33基因的同源片段。
（2）構(gòu)建重組載體：用限制性內(nèi)切核酸酶分別處理

目的基因和載體

目的基因和載體

，處理過(guò)程中用兩種限制酶，可以防止目的基因以及載體的

自身環(huán)化

自身環(huán)化

，保證POT33基因同源片段與載體的反向連接，形成反義表達(dá)載體。
（3）馬鈴薯轉(zhuǎn)化、選擇及再生：以馬鈴薯無(wú)菌苗的葉片為外植體，一般可借助

農(nóng)桿菌

農(nóng)桿菌

實(shí)現(xiàn)馬鈴薯的遺傳轉(zhuǎn)化，再將被轉(zhuǎn)化的葉片放在含抗生素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，加入的抗生素具有篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞和

殺滅農(nóng)桿菌

殺滅農(nóng)桿菌

的雙重作用；之后對(duì)脫分化形成的愈傷組織每隔適當(dāng)時(shí)間進(jìn)行

繼代

繼代

培養(yǎng)，后可通過(guò)調(diào)控培養(yǎng)基中

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類和濃度

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類和濃度

以獲得符合要求的再生植株。