當(dāng)前位置： 2022年廣東省珠海二中高考生物四模試卷> 試題詳情

三氯生是一種抑菌物質(zhì)，具有優(yōu)異的貯存穩(wěn)定性，可以替代抗生素用于基因工程中篩選含目的基因的受體細(xì)胞。已知fabV（從霍亂弧菌中發(fā)現(xiàn)的烯脂酰ACP還原酶）基因可以使大腸桿菌抵抗三氯生。

（1）通過(guò)PCR方法獲取fabV基因時(shí)，Taq酶只能從
引物的3′端
引物的3′端
延伸DNA鏈，而不能從頭開(kāi)始合成DNA，因此需要先根據(jù)
目的基因fabV基因兩端堿基序列
目的基因fabV基因兩端堿基序列
設(shè)計(jì)兩種特異性引物序列。反應(yīng)體系的初始溫度設(shè)置在90～95℃的目的是
使fabV基因受熱變性后解為單鏈
使fabV基因受熱變性后解為單鏈
。
（2）在④步驟中，科研者需將大腸桿菌菌液利用
稀釋涂布平板
稀釋涂布平板
法接種到加有
三氯生
三氯生
的細(xì)菌培養(yǎng)基上，待菌落長(zhǎng)成后，直接挑取菌落加入到PCR反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行基因鑒定。PCR過(guò)程中不需要先提取細(xì)菌DNA的原因是
大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細(xì)菌，使其釋放DNA
大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細(xì)菌，使其釋放DNA
。
（3）某科研團(tuán)隊(duì)將可以受溫度調(diào)控的基因插入上述選出的重組質(zhì)粒中，構(gòu)建了溫度調(diào)控表達(dá)質(zhì)粒（如圖2）。其中C基因在低溫下會(huì)抑制P₁，R基因在高溫下會(huì)抑制P₂。如果將lacZ基因和GFP基因插入圖2質(zhì)粒中，使得最后表現(xiàn)為低溫下只表達(dá)GFP蛋白，而高溫下只表達(dá)lacz蛋白。則lacZ基因插在
P₁→T₁
P₁→T₁
之間，GFP基因插在
P₂→T₂
P₂→T₂
之間。

【答案】引物的3′端；目的基因fabV基因兩端堿基序列；使fabV基因受熱變性后解為單鏈；稀釋涂布平板；三氯生；大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細(xì)菌，使其釋放DNA；P₁→T₁；P₂→T₂

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：33引用：3難度：0.5

相似題

1．PCR是利用體內(nèi)DNA復(fù)制的原理，進(jìn)行生物體外復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)。請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題：
（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、

、

。
（2）科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn) DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的半保留復(fù)制過(guò)程，有一條子鏈?zhǔn)窍群铣啥痰腄NA片段（稱為岡崎片段），再形成較長(zhǎng)的分子，可推測(cè)參與以上過(guò)程的酶有DNA聚合酶、

、

。在PCR過(guò)程中無(wú)岡崎片段形成，原因是細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的復(fù)制過(guò)程特點(diǎn)是

，PCR過(guò)程的特點(diǎn)是

。
（3）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知 ddNTP按堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式加到正在復(fù)制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過(guò)PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長(zhǎng)度的子鏈DNA片段，將以上子鏈 DNA片段進(jìn)行電泳分離可得到

種不同長(zhǎng)度的子鏈 DNA片段。為使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA 聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A.dGTP，dATP，dTTP
B.dGTP、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C.dGTP，dATP，dTTP，dCTP
D.ddGTP，ddATP，ddTTP，ddCTP
（4）如圖3為形成單鏈DNA后，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增示意圖。

催化①過(guò)程的酶是

；核酸酶H的作用是

。如果某RNA單鏈中一共有80個(gè)堿基，其中C有15個(gè)，A與U之和占該鏈堿基含量的40%，經(jīng)過(guò)以上若干過(guò)程后共獲得8個(gè)雙鏈 DNA，此過(guò)程中至少需加入G參與組成的核苷酸數(shù)量為

（以上過(guò)程不考慮引物）。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：19引用：1難度：0.7
解析

2．原位PCR技術(shù)是利用原位PCR儀，在組織或細(xì)胞中靶DNA所在的位置上進(jìn)行的PCR循環(huán)擴(kuò)增，通過(guò)摻入標(biāo)記基因直接顯色或結(jié)合原位雜交進(jìn)行檢測(cè)的方法。進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)體系中的反應(yīng)成分需滲透到組織或細(xì)胞的靶DNA處才能進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系中需要添加一定濃度的Mg²⁺，而組織細(xì)胞間的物質(zhì)會(huì)吸附Mg²⁺，使進(jìn)入細(xì)胞的Mg²⁺減少。下列說(shuō)法正確的是（　?。?/h2>

A．PCR技術(shù)中復(fù)性是當(dāng)溫度下降到65℃時(shí)，兩種引物與兩條DNA單鏈結(jié)合的過(guò)程

B．反應(yīng)體系中dNTP作為擴(kuò)增的原料，會(huì)依次連接到子鏈的5′端

C．反應(yīng)體系中引物的G，C堿基含量越高越好，因?yàn)樵礁咭锝Y(jié)合的特異性越強(qiáng)

D．原位PCR反應(yīng)體系中使用的Mg²⁺濃度要比常規(guī)PCR高

發(fā)布：2024/10/31 21:0:2組卷：10引用：3難度：0.7

解析

3．在新冠病毒的核酸檢測(cè)過(guò)程中采用的逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR），是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的廣泛應(yīng)用。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA，再以此為模板通過(guò)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增，進(jìn)而獲得檢測(cè)的目的基因S。下列關(guān)于RT-PCR的敘述錯(cuò)誤的是（　?。?/h2>

A．RT-PCR所用的酶包括逆轉(zhuǎn)錄酶和熱穩(wěn)定RNA聚合酶

B．RT-PCR所用的兩引物序列不同，兩者間可進(jìn)行互補(bǔ)配對(duì)

C．RT-PCR過(guò)程中需添加ATP，反應(yīng)過(guò)程中會(huì)有磷酸鍵斷裂

D．至少經(jīng)過(guò)2次循環(huán)，方可獲取與目的基因等長(zhǎng)的DNA單鏈

發(fā)布：2024/10/31 0:0:1組卷：4引用：1難度：0.6

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