普通PCR在擴(kuò)增DNA的過程中存在一定概率的堿基錯(cuò)誤配對(duì)，得到部分的錯(cuò)誤產(chǎn)物。巢式PCR是一種在普通PCR基礎(chǔ)上改良的新型PCR技術(shù)，擴(kuò)增的精確性比普通PCR更高。巢式PCR對(duì)目標(biāo)DNA進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)需要用到兩對(duì)不同的引物，首先使用第一對(duì)引物（外引物）對(duì)目標(biāo)DNA進(jìn)行第一次擴(kuò)增得到中間產(chǎn)物，然后使用第二對(duì)引物（內(nèi)引物）對(duì)中間產(chǎn)物進(jìn)行第二次擴(kuò)增得到目標(biāo)產(chǎn)物，過程如圖所示。請(qǐng)回答相關(guān)問題：
（1）PCR的原理是 DNA的復(fù)制DNA的復(fù)制，PCR反應(yīng)體系一般都需要加入一定量的，其作用是 激活DNA聚合酶激活DNA聚合酶。
（2）巢式PCR通常在第一支試管中進(jìn)行第一次擴(kuò)增，然后把得到的中間產(chǎn)物分離出來轉(zhuǎn)移到另外一支試管中進(jìn)行第二次擴(kuò)增反應(yīng)，兩次擴(kuò)增不在同一支試管中擴(kuò)增的原因是 防止內(nèi)引物直接參與第一次的擴(kuò)增，無法實(shí)現(xiàn)巢式PCR高精確性擴(kuò)增的目的防止內(nèi)引物直接參與第一次的擴(kuò)增，無法實(shí)現(xiàn)巢式PCR高精確性擴(kuò)增的目的。使用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)模板DNA與中間產(chǎn)物分離時(shí)，由于中間產(chǎn)物的分子量較小，所以相同時(shí)間內(nèi)在凝膠中的遷移距離更 大大。
（3）如果巢式PCR第一次擴(kuò)增得到的某中間產(chǎn)物的部分堿基發(fā)生了替換，則第二次擴(kuò)增時(shí)內(nèi)引物與該中間產(chǎn)物配對(duì)并擴(kuò)增的概率 降低降低。如果想進(jìn)一步減少錯(cuò)誤目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)生，還可以適當(dāng) 提高提高（填“提高”或“降低”）復(fù)性的溫度。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】DNA的復(fù)制；激活DNA聚合酶；防止內(nèi)引物直接參與第一次的擴(kuò)增，無法實(shí)現(xiàn)巢式PCR高精確性擴(kuò)增的目的；大；降低；提高
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：5引用：2難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列。回答下列問題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過的兩個(gè)過程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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