藻類(lèi)生物柴油是一種可持續(xù)性柴油燃料。紫蘇種子中含大量油脂，出油率能達(dá)35%-64%，三酰甘油（TAG）是紫蘇種子最主要的儲(chǔ)藏脂類(lèi)，DGAT1是TAG合成途徑的關(guān)鍵酶。如圖1所示，科研人員將紫蘇DGAT1基因?qū)胛⒃鍢?gòu)建高產(chǎn)油工程藻。請(qǐng)回答：

（1）提取紫蘇總RNA經(jīng)過(guò)

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

得到cDNA，再采用PCR方法擴(kuò)增出紫蘇DGAT1基因的cDNA編碼區(qū)序列。
（2）DGAT1基因序列兩端無(wú)BamHⅠ和HindⅢ限制酶酶切位點(diǎn)，可在PCR技術(shù)設(shè)計(jì)引物時(shí)，在引物一端加上相應(yīng)識(shí)別序列，經(jīng)PCR技術(shù)擴(kuò)增后，可獲得相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列的擴(kuò)增片段。已知，應(yīng)在圖2中DGAT1基因的左端加上BamHⅠ識(shí)別序列，DGAT1基因的右端加上HindⅢ識(shí)別序列。則根據(jù)圖2中信息推測(cè)，引物1的

5'

5'

（填“5′”或“3′”）端加上限制酶BamHⅠ的識(shí)別序列

5'-GGATCC-3'

5'-GGATCC-3'

；引物2的相應(yīng)端加上HindⅢ限制酶的相應(yīng)識(shí)別序列。

（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，只考慮兩兩連接，可產(chǎn)生

3

3

種重組產(chǎn)物。用含有卡那霉素的培養(yǎng)基對(duì)重組產(chǎn)物進(jìn)行篩選，不能篩選出所需的轉(zhuǎn)DGAT1基因的工程藻，其原因是

若發(fā)生了運(yùn)載體與運(yùn)載體連接，工程藻細(xì)胞內(nèi)仍含有卡那霉素抗性基因，也能存活

若發(fā)生了運(yùn)載體與運(yùn)載體連接，工程藻細(xì)胞內(nèi)仍含有卡那霉素抗性基因，也能存活

。若要篩選出所需的轉(zhuǎn)DGAT1基因的工程藻，還需檢測(cè)工程藻的

出油率

出油率

，并與普通微藻相比，以進(jìn)行篩選。