“實(shí)時(shí)熒光定量qPCR”是新冠疫情防控的一把利刃,通常在1~2h內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果。TaqMan探針是實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)中一種常用探針(如圖1),其5′端連接熒光基團(tuán)(R),3′端連接淬滅劑(Q)。當(dāng)探針完整時(shí),R發(fā)出的熒光信號(hào)被Q吸收而不發(fā)熒光。在PCR擴(kuò)增過程中,當(dāng)TaqDNA聚合酶遇到探針時(shí)會(huì)使探針?biāo)舛尫懦鲇坞x的R和Q,R發(fā)出的熒光信號(hào)被相應(yīng)儀器檢測(cè)到,熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物數(shù)量完全同步(如圖2)。請(qǐng)據(jù)圖回答:
(1)結(jié)合圖1和圖2分析,“熒光RT-PCR技術(shù)”所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有
逆(反)轉(zhuǎn)錄
逆(反)轉(zhuǎn)錄
酶、Taq
Taq
酶、TaqMan探針、引物、dNTP、Mg2+、緩沖劑等。這種分子層面的熒光RT-PCR檢測(cè)具有特異性和靈敏性都很高的特點(diǎn),主要與試劑盒中的 引物
引物
、TaqMan探針
TaqMan探針
有關(guān)。
(2)根據(jù)TaqMan探針功能分析,探針中堿基序列的設(shè)計(jì)應(yīng)主要依據(jù) 新冠病毒RNA內(nèi)部的一段序列(新冠病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA的部分序列)
新冠病毒RNA內(nèi)部的一段序列(新冠病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA的部分序列)
。新冠病毒(2019-nCoV)是冠狀病毒大家庭中的新的一員,其堿基序列與引起SARS的冠狀病毒堿基序列有79.5%的相似性,與流感病毒堿基相似度也較高,因此在設(shè)計(jì)TaqMan探針時(shí)應(yīng)篩選出2019-nCoV特有序列,以避免 假陽性
假陽性
(填“假陰性”或“假陽性”)的出現(xiàn)。
(3)根據(jù)圖1和圖2,Taq DNA聚合酶除了能催化DNA子鏈的延伸,還能 催化RNA(TaqMan探針)的水解
催化RNA(TaqMan探針)的水解
。
(4)IgM和IgG均屬于免疫球蛋白家族,是機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下由漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。IgM/IgG檢測(cè)試劑盒的原理是 抗原抗體特異性結(jié)合
抗原抗體特異性結(jié)合
,通過檢測(cè)人體內(nèi)相應(yīng)抗體間接證明是否感染。被病毒感染后,機(jī)體會(huì)產(chǎn)生一系列的變化來抵御這種入侵,其中IgM和IgG的含量會(huì)發(fā)生如圖3所示變化。
通過對(duì)COVID-19患者研究發(fā)現(xiàn),病毒侵入人體后,大約需要5~7天產(chǎn)生IgM抗體,IgG抗體在感染后10~15天時(shí)產(chǎn)生。通過檢測(cè)外周血中IgM和IgG,不僅可以鑒別是否感染,還可以辨別檢測(cè)者是近期感染或者是既往感染。當(dāng)核酸檢測(cè)結(jié)果為陽性,IgM(+)IgG(-)時(shí),可判斷檢測(cè)者為 近期感染
近期感染
;已治愈的患者檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為 核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性,IgM (-) IgG (+)
核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性,IgM (-) IgG (+)
。