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新冠病毒在人體細胞表面蛋白受體由ACE2控制表達,該基因的開放閱讀框(mRNA 從起始密碼子到終止密碼子之間的核苷酸序列)cDNA序列大小為2418bp(bp表示堿基對),在280bp和1070bp位點分別有一個HindⅢ和Xho I酶切位點(圖1)。甲、乙兩位同學通過分子生物學方法克隆該基因到 pMD18-T載體(圖2)中,各自的測序結果如圖4,并進一步通過雙酶切獲得ACE2基因編碼序列與pEGFP-N1(圖2)載體重組(MCS多酶切位點序列如圖3所示)并表達。試分析回答下列問題:
菁優(yōu)網(wǎng)
(1)根據(jù)圖2可知,兩種載體都具有的基本結構有
復制原點
復制原點
標記基因
標記基因
限制酶切割位點。
(2)ACE2基因與pMD18-T載體構建的重組質粒經(jīng)轉化后細胞需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中篩選的原因是
載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr
載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr
。
(3)甲、乙兩位同學均得到ACE2基因的PCR產(chǎn)物與pMD18-T載體的重組質粒,針對ACE2基因的部分測序結果如圖4,并進一步利用圖4中標記的限制酶進行雙酶切,獲得ACE2基因編碼序列,同時用相同限制酶酶切 pEGFP-N1載體,然后構建重組質粒。兩位同學對獲得的重組質粒進行酶切檢測:①甲同學只得到空載體;②乙同學在重組質粒中檢測到了1348 bp 部分目的基因片段。請對該實驗結果進行分析:
甲同學用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構建的重組質粒后,5’端均突出—GATC,產(chǎn)生相同的黏性末端,載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后,可以自連,很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質粒
甲同學用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構建的重組質粒后,5’端均突出—GATC,產(chǎn)生相同的黏性末端,載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后,可以自連,很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質粒
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乙同學用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構建的重組質粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp,ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個XhoⅠ酶切位點,酶切后便可以得到一個1348bp(2418—1070=1348)的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構建重組質粒
乙同學用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構建的重組質粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp,ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個XhoⅠ酶切位點,酶切后便可以得到一個1348bp(2418—1070=1348)的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構建重組質粒
。

【答案】復制原點;標記基因;載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr;甲同學用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構建的重組質粒后,5’端均突出—GATC,產(chǎn)生相同的黏性末端,載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后,可以自連,很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質粒;乙同學用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構建的重組質粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp,ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個XhoⅠ酶切位點,酶切后便可以得到一個1348bp(2418—1070=1348)的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構建重組質粒
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復制發(fā)布。
發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:1引用:1難度:0.6
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  • 1.某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列,并運用交錯延伸PCR技術獲得了抗蟲性能強的重組B基因,轉入煙草獲得成功,過程如圖所示。下列選項正確的是( ?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)
    注:①交錯延伸PCR:基因Bt1和Bt2均作為模板,所需引物相同,圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細胞中特異性啟動基因的轉錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉錄獲得的DNA片段,可使植物細胞合成生長素。

    發(fā)布:2024/11/16 21:0:1組卷:36引用:2難度:0.5
  • 2.基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速,如圖表示利用基因工程技術生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是( ?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布:2024/11/14 7:0:1組卷:62引用:7難度:0.7
  • 3.經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應,嚴重時甚至危及生命,因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶(MCO)能高效分解生物胺,基于基因工程規(guī)模化生產(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因,然后轉入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    (1)通過上述基因工程技術獲取目標產(chǎn)物,涉及如下步驟,則合理的操作步驟排序是
     
    (填寫下列編號)。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?;a(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因導入受體細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構建表達載體
    (2)在PCR過程中,引物的功能是
     
    。
    A.啟動DNA復制
    B.規(guī)定擴增區(qū)間
    C.解旋DNA雙鏈
    D.充當復制模板
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    (3)為獲得目的基因MCO(圖甲灰色表示的序列),正確設計的PCR引物應為圖甲中的
     
    。
    (4)獲取目的基因后,需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質是
     
    (填DNA或RNA/DNA或RNA)。
    (5)在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中,溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    (6)若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端,那么載體質粒pCLY15(圖丙中圖1)需用
     
     
    切開,才能與MCO片段高效連接。
    (7)下列實驗操作中,能有效鑒別載體質粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     

    A.從抗藥性克隆中提取質粒DNA,用合適的限制酶切割
    B.在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑,以克隆的顏色進行鑒別
    C.從抗藥性克隆中提取質粒DNA,以此為模板進行PCR檢測
    D.將Ap抗性克隆轉移至含Tc(四環(huán)素)的平板上,根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布:2024/11/14 4:30:2組卷:29引用:3難度:0.5
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