30.尿素[CO（NH₂）₂]含氮量高，化學性質(zhì)相對穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥，但若不經(jīng)細菌的分解，就不能更好地被植物利用，某科研小組為了將土壤中分解尿素的細菌純化培養(yǎng)，進行了如下操作，請回答相關(guān)問題：

成分	KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4?7H2O	葡萄糖	尿素	瓊脂
含量（g）	1.4	2.1	0.2	10.0	1.0	15.0
操作	將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000毫升

（1）如表是尿素分解菌的選擇培養(yǎng)基配方，在此基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需滿足微生物生長所需的環(huán)境因素有

pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣

pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣

（寫出兩點）。
（2）本實驗中有兩組對照，一組是未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板和選擇培養(yǎng)基平板，另一組是已接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板。前一組的平板上如果

沒有菌落生長

沒有菌落生長

，可以說明培養(yǎng)基在使用前未被雜菌污染；后一組的平板上如果

菌落數(shù)顯著多于同一稀釋度的選擇培養(yǎng)基平板上的

菌落數(shù)顯著多于同一稀釋度的選擇培養(yǎng)基平板上的

，可以說明選擇培養(yǎng)基具有選擇作用。
（3）如圖中圖2所示方法接種工具至少需灼燒滅菌

5

5

次。
（4）將5g土壤溶于45mL無菌水，再稀釋10⁵倍，按圖[

1

1

]

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

（填數(shù)字及名稱）接種方式將0.1mL樣品接種到3個培養(yǎng)基上，統(tǒng)計菌落數(shù)目為134、131、137，據(jù)此可得出每克土壤中的纖維素分解菌活菌數(shù)約為

1.34×10⁹

1.34×10⁹

個。若某同學利用相同樣品進行接種，只統(tǒng)計出34個菌落，出現(xiàn)該結(jié)果的原因可能是

涂布器灼燒后未冷卻，或培養(yǎng)液未搖勻，樣品中菌體數(shù)量少

涂布器灼燒后未冷卻，或培養(yǎng)液未搖勻，樣品中菌體數(shù)量少

。
（5）土壤中的某些固氮菌可以利用空氣中的氮氣作為氮源（如圓褐固氮菌能將大氣中的氮氣轉(zhuǎn)化為NH₃），請設(shè)計實驗進一步確定平板上分離得到的細菌是否是固氮菌（寫出簡要思路、預期結(jié)果和結(jié)論）

將平板上分離得到的細菌接種到無氮源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若能生長，說明該菌為固氮菌，否則不是固氮菌

將平板上分離得到的細菌接種到無氮源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若能生長，說明該菌為固氮菌，否則不是固氮菌

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