科研人員獲取了PHB2蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），利用基因工程的方法使大腸桿菌表達該蛋白，以便進一步檢測PHB2蛋白抑制腫瘤細胞增殖和擴散的效果。如圖1是phb2基因編碼區(qū)序列以及兩端需添加的、能被相關(guān)酶識別的序列，圖2為研究所用表達載體示意圖，表格為有關(guān)的限制酶種類及識別序列和切割位點?；卮鹣铝袉栴}：
| 限制酶種類 | SpeⅠ | PvitⅡ | BamHⅠ | XbaⅠ |
| 識別序列 | 5'A↓CTAGT3′ | 5'CAG↓CTG3′ | 5'G↓GATCC3′ | 5'T↓CTAGA3′ |
5'端
5'端
（填“3'端”或“5'端”）添加限制酶識別序列。據(jù)圖可推斷，擴增α鏈時需添加的限制酶識別序列以及所用引物的堿基序列是5'CAGCTGTCATTT
CAGCTGTCATTT
3'。已知AUG為PHB2蛋白合成的起始密碼子，則構(gòu)建符合要求的表達載體所用的工具酶有PvitⅡ、XbaⅠ、T4DNA連接酶
XbaⅠ、T4DNA連接酶
。（2）將符合要求的基因表達載體導(dǎo)入工程菌后，可用
抗原—抗體雜交
抗原—抗體雜交
技術(shù)檢測PHB2蛋白是否合成，通過提取、分離和純化，從發(fā)酵液中獲得該蛋白。為防止PHB2蛋白在工程菌細胞中被降解，在發(fā)醉過程中應(yīng)選用 蛋白酶
蛋白酶
缺陷型工程菌作為受體細胞，且在發(fā)酵結(jié)束后的純化過程中應(yīng)添加蛋白酶抑制劑。（3）腫瘤細胞通常培養(yǎng)在
95%的空氣和5%的CO2
95%的空氣和5%的CO2
（氣體及比例）的恒溫培養(yǎng)箱中，將適量PHB2蛋白加入培養(yǎng)液后，若腫瘤細胞 增殖速率減慢（或數(shù)量減少）、細胞膜上的糖蛋白減少
增殖速率減慢（或數(shù)量減少）、細胞膜上的糖蛋白減少
，則表明該蛋白具有抑制腫瘤細胞增殖和擴散作用，據(jù)此可進一步地深入研究。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】5'端；CAGCTGTCATTT；XbaⅠ、T4DNA連接酶；抗原—抗體雜交；蛋白酶；95%的空氣和5%的CO2；增殖速率減慢（或數(shù)量減少）、細胞膜上的糖蛋白減少
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/4 8:0:5組卷：7引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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