藍細菌中的ictB蛋白能高效轉運和濃縮CO₂從而提高細胞光合速率，我國科學家構建了葉片特異性啟動子Cab（葉綠體捕光色素蛋白Cab基因啟動子）驅動的藍細菌ictB基因表達載體，并通過農桿菌轉化法獲得了轉ictB基因水稻，大大提高了水稻的產量。在ictB基因載體的構建中，含Cab啟動子和ictB基因的重組DNA分子和Ti質粒的酶切位點如圖1所示。請回答下列問題：

（1）為使重組DNA分子能定向插入T-DNA中，可用PCR的方法在重組DNA分子兩端添加限制酶識別序列，據圖可知，M端添加的序列所對應的限制酶是

BglⅠ

BglⅠ

，N端添加的序列所對應的限制酶是

EcoRV

EcoRV

。經過酶切的重組DNA分子和Ti質粒進行連接時，可選用

DNA連接酶

DNA連接酶

（填“E.coli DNA連接酶”或“DNA連接酶”）。添加了限制酶識別序列的重組DNA分子與Ti質粒的重組過程共需要

4

4

種酶。
（2）將農桿菌液浸泡過的水稻愈傷組織進行植物組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基中需加入

潮霉素

潮霉素

進行篩選，最終獲得多個水稻株系a₁、a₂、a₃、a₁。對a₁～a₁四個水稻株系的ictB蛋白表達量進行測定，結果如圖2，其中a₄株系ictB蛋白表達量較低的原因可能是

a₄水稻株系中目的基因未表達

a₄水稻株系中目的基因未表達

，檢測應選用的植物器官是

葉片

葉片

，原因是

Cab啟動子是葉片特異性啟動子，它使ictB基因只能選擇性的在葉片中表達

Cab啟動子是葉片特異性啟動子，它使ictB基因只能選擇性的在葉片中表達

。