某種熒光蛋白（GFP）在紫外線或藍(lán)光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5′末端，獲得了L1-GFP融合基因（簡稱甲），并將其插入質(zhì)粒PO，構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切點(diǎn)的示意圖如下，圖中E1～E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。

回答下列問題：
（1）據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊在將甲插入質(zhì)粒PO時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是

E1、E4

E1、E4

。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證

甲的完整

甲的完整

，也是為了保證

甲與載體正確連接

甲與載體正確連接

。
（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色的熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了

轉(zhuǎn)錄

轉(zhuǎn)錄

和

翻譯

翻譯

過程。
（3）為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的

細(xì)胞核

細(xì)胞核

移入牛的

去核卵母細(xì)胞

去核卵母細(xì)胞

中，體外培養(yǎng)，胚胎移植等。
（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定。在鑒定時應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的

核DNA

核DNA

（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。