某種熒光蛋白（GFP）在紫外線或藍(lán)光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5′末端，獲得了L1-GFP融合基因（簡稱甲），并將其插入質(zhì)粒PO，構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切點(diǎn)的示意圖如下，圖中E1～E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。
回答下列問題：
（1）據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊在將甲插入質(zhì)粒PO時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是E1、E4E1、E4。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證甲的完整甲的完整，也是為了保證甲與載體正確連接甲與載體正確連接。
（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色的熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄和翻譯翻譯過程。
（3）為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的細(xì)胞核細(xì)胞核移入牛的去核卵母細(xì)胞去核卵母細(xì)胞中，體外培養(yǎng)，胚胎移植等。
（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定。在鑒定時應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的核DNA核DNA（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】E1、E4；甲的完整；甲與載體正確連接；轉(zhuǎn)錄；翻譯；細(xì)胞核；去核卵母細(xì)胞；核DNA
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：906引用：16難度：0.3
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
3．如表為5種限制酶的識別序列及切割位點(diǎn)，如圖為某種質(zhì)粒和目的基因，箭頭所指為限制酶酶切位點(diǎn)?，F(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中，以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是（ ?。?
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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