科研人員克隆了豬白細胞抗原基因(SLA-2基因),構(gòu)建了該基因的真核表達載體,進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如圖1,SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復制原點的距離。請回答:
限制酶 |
BclⅠ |
NotⅠ |
XbaⅠ |
San3AⅠ |
識別序列及切割位點 |
T↓GATCA |
GC↓GGCCGC |
T↓CTAGA |
↓GATC |
(1)過程①中,PCR擴增SLA-2的原理是
DNA復制
DNA復制
,下列4種引物中應選擇的是
a、b
a、b
。
a 5'-GC
TCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTT
GCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GC
GATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTT
TGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
(2)過程②將重組質(zhì)粒導入大腸桿菌的目的是
擴增重組DNA分子
擴增重組DNA分子
,該過程需要用
Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌,使其成為感受態(tài)細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有
氨芐青霉素
氨芐青霉素
(抗生素)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
(3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳,請在答題紙相應位置畫出可能得到的電泳條帶。
(4)科研中常用呤霉素對真核細胞進行篩選,一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是:既可以讓大部分沒有抗性的細胞死亡又不會讓
具有抗性的細胞死亡
具有抗性的細胞死亡
。實驗結(jié)果如圖2,根據(jù)實驗結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為
80ug/mL
80ug/mL
。
(5)過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細胞生產(chǎn)的抗原肽,其原理是
抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
,單克隆抗體能檢測其是否具有正確的
抗原肽
抗原肽
,從而是否具有生物活性。