養(yǎng)殖家禽的飼料中富含谷物，纖維素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纖維素的酶，阻礙了家禽對(duì)飼料的吸收與利用。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造乳酸桿菌，將其添加于飼料中，以提高家禽養(yǎng)殖效率。

（1）乳酸桿菌是動(dòng)物胃腸道的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌之一。家禽腸道內(nèi)的乳酸桿菌通過(guò)細(xì)胞

無(wú)氧

無(wú)氧

呼吸產(chǎn)生乳酸等代謝產(chǎn)物，常見(jiàn)的乳酸菌除了乳酸桿菌，還有

乳酸鏈球菌

乳酸鏈球菌

。
（2）枯草芽孢桿菌分泌可降解纖維素的一種酶，這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達(dá)W基因，需使用圖1中質(zhì)粒為載體。圖2為克隆得到的含W基因的DNA片段，W基因以乙鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身延伸的方向?yàn)?′→3′。
①很多啟動(dòng)子具有物種特異性，在圖1質(zhì)粒中插入W基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇

B

B

（填寫(xiě)字母）。
A．枯草芽孢桿菌啟動(dòng)子
B．乳酸桿菌啟動(dòng)子
C．農(nóng)桿菌啟動(dòng)子
②如表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。

限制酶	EcoRⅠ	BamHⅠ	KpmⅠ	MfeⅠ	HindⅡ
識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)	5′-G↓AATTC-3′ 3′-CTTAA↑G-5′	5′-G↓GATCC-3 3′CCTAG↓G-5	5′-GGTAC↓C-3 3′-C↑CATGG-5	5′-C↓AATTG-3 3′-GTTAA↑C-5	5′A↓AGCTT-3′ 3′-TTCGA↑A-5′

根據(jù)上述信息，應(yīng)使用限制酶

MfeⅠ、HindⅢ

MfeⅠ、HindⅢ

切割圖1中質(zhì)粒，使用限制酶

EcoRⅠ、HindⅢ

EcoRⅠ、HindⅢ

切割圖2中含W基因的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒。所得重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化乳酸桿菌后，使用含抗生素

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的培養(yǎng)基篩選，以得到轉(zhuǎn)入W基因的乳酸桿菌。
（3）為確定導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌是否具有分解纖維素的能力，研究人員用液體培養(yǎng)基分別培養(yǎng)下表所示菌種。所得部分菌液接種于固體鑒定培養(yǎng)基上，另取部分菌液上清液測(cè)定酶活力，實(shí)驗(yàn)方案及測(cè)定結(jié)果如表所示。

菌種	酶活性相對(duì)值
乳酸桿茵	未檢出
X	未檢出
導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌	0.96

①表中的X應(yīng)為

導(dǎo)入空質(zhì)粒的乳酸菌

導(dǎo)入空質(zhì)粒的乳酸菌

。
②在配制固體鑒定培養(yǎng)基時(shí)，除加入無(wú)機(jī)鹽、剛果紅、維生素、氮源、水外，還需要添加

纖維素、瓊脂

纖維素、瓊脂

。導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌在此培養(yǎng)基上應(yīng)出現(xiàn)

以菌落為中心的透明圈

以菌落為中心的透明圈

。