乳酸菌無氧呼吸過程中，第一階段產(chǎn)生的丙酮酸會(huì)在LDH的催化下產(chǎn)生乳酸，科學(xué)家通過改造乳酸脫氫酶（LDH），能夠高效地生產(chǎn)高純度的苯乳酸。
（1）科學(xué)家擬改造LDH基因成為mLDH基因，需將LDH第52位的酪氨酸替換為亮氨酸，使得活性中心增大，可用于生產(chǎn)苯乳酸。
①先將LDH基因片段連入載體中，形成環(huán)狀質(zhì)粒，如圖1。
將突變后的序列設(shè)計(jì)在引物1中，以環(huán)狀質(zhì)粒為PCR的 模板模板，再向體系中加入四種脫氧核苷酸（dNTP）、TaqTaq酶、引物2引物2以及堿基替換后的引物進(jìn)行擴(kuò)增LDH基因，PCR產(chǎn)物的序列便引入了預(yù)期的突變。下列引物序列中符合引物1要求的有 AA、DD。
A．5'-TGACTGACTAACACTCGGAC-3'
B．5'-TGACTGACAACCACTCGGAC-3'
C．5'-TGACTGACGATCACTCGGAC-3'
D．5'-TGACTGACGAGCACTCGGAC-3'
②上述PCR產(chǎn)物為 鏈鏈狀DNA分子，改造后的LDH基因序列位于PCR產(chǎn)物的兩側(cè)，需要用 DNA連接DNA連接酶將產(chǎn)物兩端連接，獲得含有mLDH基因的質(zhì)粒。
（2）產(chǎn)生苯乳酸的過程還需FDH酶參與，現(xiàn)需要構(gòu)建同時(shí)含有mLDH、FDH的基因表達(dá)載體。根據(jù)圖2信息，先用限制酶 NdeⅠNdeⅠ和 XhoⅠXhoⅠ切割 質(zhì)粒2質(zhì)粒2（質(zhì)粒1/質(zhì)粒2）和空載體，將兩種酶切產(chǎn)物連接獲得連接產(chǎn)物，再酶切另一質(zhì)粒和上一步中的連接產(chǎn)物，連接獲得基因表達(dá)載體。
（3）上述科學(xué)實(shí)踐屬于生物工程中的 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】模板；Taq；引物2；A；D；鏈；DNA連接；NdeⅠ；XhoⅠ；質(zhì)粒2；蛋白質(zhì)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：28引用：1難度：0.7
相似題
-
1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
相關(guān)試卷