玉米（2n=20）是我國栽培面積最大的作物。為使其獲得抗除草劑性狀，獲得抗除草劑轉基因玉米自交系A，技術路線如圖。

（1）為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構建表達載體需用2種限制酶，選擇的原則是

A

A

（單選）。
①Ti質粒內(nèi)，每種限制酶只有一個切割位點
②G基因編碼蛋白質的序列中，每種限制酶只有一個切割位點
③酶切后，G基因形成的兩個黏性末端序列不相同
④酶切后，Ti質粒形成的兩個黏性末端序列相同
A．①③B．①④C．②③D．②④
（2）質粒載體作為基因工程的工具，應具備的基本條件有

復制原點和酶切位點

復制原點和酶切位點

（答出兩點即可）。
而作為基因表達載體，除滿足上述基本條件外，還需具有

啟動子和終止子

啟動子和終止子

（答出兩點即可）。
（3）如表是4種玉米自交幼胚組織培養(yǎng)不同階段的結果。據(jù)表可知，細胞脫分化時使用的激素是

2，4-D

2，4-D

，自交系

乙

乙

的幼胚最適合培養(yǎng)成愈傷組織作為轉化受體。

激素 結果 自交系	2，4-D（2.0mg/L）	6-BA（0.5mg/L）	IBA（2.0mg/L）
	愈傷組織形成率（%）	芽的分化率（%）	根的誘導率（%）
甲	99	13	90
乙	85	80	87
丙	88	83	12
丁	16	85	83

（4）常用Ca²⁺處理土壤農(nóng)桿菌，其目的是

提高受體細胞的轉化率

提高受體細胞的轉化率

。農(nóng)桿菌的T-DNA攜帶插入其內(nèi)的片段轉移到受體細胞的

染色體DNA

染色體DNA

上。篩選轉化的愈傷組織，需使用含

除草劑

除草劑

的選擇培養(yǎng)基。
（5）轉化過程中，愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，導致未轉化愈傷組織隔壁可能在選擇培養(yǎng)基上生長。含有內(nèi)含子的報告基因只能在真核生物中正確表達，其產(chǎn)物能催化無色物質K呈現(xiàn)藍色。用K分別處理以下愈傷組織，出現(xiàn)藍色的是

BD

BD

（多選）。
A．無農(nóng)桿菌附著的未轉化愈傷組織
B．無農(nóng)桿菌附著的轉化愈傷組織
C．農(nóng)桿菌附著的未轉化愈傷組織
D．農(nóng)桿菌附著的轉化愈傷組織
（6）組織培養(yǎng)獲得的轉基因植株（核DNA中僅插入一個G基因）進行自交，在子代含G基因的植株中，純合子占

1

3

1

3

。繼續(xù)篩選，最終選育出抗除草劑純合自交系A。
（7）如表是鑒定含G基因植株的4種方法。請預測同一后代群體中，4種方法檢出的含G基因植株的比例，從小到大依次是

X4，X3，X2，X1

X4，X3，X2，X1

。

方法	檢測對象	檢測目標	檢出的含G基因植株的比例
PCR擴增	基因組DNA	G基因	X1
分子雜交	總mRNA	G基因轉錄產(chǎn)物	X2
抗原-抗體雜交	總蛋白質	G基因編碼的蛋白質	X3
噴灑除草劑	幼苗	抗除草劑幼苗	X4