新冠病毒（+RNA）的刺突蛋白S通過(guò)與人體黏膜細(xì)胞表面的ACE2受體結(jié)合而進(jìn)入細(xì)胞，是宿主抗體的重要作用位點(diǎn)。下圖1是科研人員利用新冠病毒的+RNA提取S蛋白基因和S蛋白受體結(jié)合域RBD基因作為抗原基因序列，研制新冠病毒雙抗原疫苗的技術(shù)路線。已知PCR1與PCR2要分別進(jìn)行，然后將產(chǎn)物混合，使用引物1和引物4進(jìn)行PCR3，最終獲得大量S-RBD融合基因（1300bp）。

（1）PCR3過(guò)程中，片段1與片段2連接形成S-RBD融合基因，需要使用

耐高溫DNA聚合

耐高溫DNA聚合

酶，該酶的作用是

將單個(gè)的脫氧核苷酸連接到引物的3'端

將單個(gè)的脫氧核苷酸連接到引物的3'端

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（2）為使S-RBD融合基因在工程菌中表達(dá)時(shí)，先合成S蛋白，在重組pX質(zhì)粒中，引物4對(duì)應(yīng)的區(qū)段要連接在靠近

啟動(dòng)子

啟動(dòng)子

（填“啟動(dòng)子“或“終止子”）的部位，原因是

原核細(xì)胞中基因表達(dá)時(shí)可以邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯，引物4對(duì)應(yīng)的區(qū)段靠近啟動(dòng)子時(shí)先轉(zhuǎn)錄出S蛋白的mRNA序列

原核細(xì)胞中基因表達(dá)時(shí)可以邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯，引物4對(duì)應(yīng)的區(qū)段靠近啟動(dòng)子時(shí)先轉(zhuǎn)錄出S蛋白的mRNA序列

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（3）為初步檢測(cè)過(guò)程B構(gòu)建是否成功，對(duì)重組pX系列質(zhì)粒及其酶切產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖2。據(jù)圖可知，酶切時(shí)用到的酶是

HindⅢ、Ndel、EcoRI

HindⅢ、Ndel、EcoRI

，重組質(zhì)粒pX2和pX5構(gòu)建成功的依據(jù)是

重組質(zhì)粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段堿基對(duì)總和為S—RBD融合基因長(zhǎng)度1300

重組質(zhì)粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段堿基對(duì)總和為S—RBD融合基因長(zhǎng)度1300

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（4）在工程菌的篩選時(shí)，可先后用兩種抗生素進(jìn)行影印培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（將首次培養(yǎng)的菌落用滅菌絨布沾取印到新培養(yǎng)基上培養(yǎng)），在第二次培養(yǎng)時(shí)存活的菌落是否含有目的基因

否

否

（填“是”或“否”）。鑒定pX質(zhì)粒是否導(dǎo)入工程菌還可以采用的方法是

觀察菌落是否具有熒光，有熒光的則含有pX質(zhì)粒

觀察菌落是否具有熒光，有熒光的則含有pX質(zhì)粒

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（5）試從免疫學(xué)角度分析此種雙抗原疫苗比常規(guī)S蛋白疫苗更具優(yōu)勢(shì)的原因

此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結(jié)合域RBD，有利于進(jìn)入靶細(xì)胞，從而激發(fā)細(xì)胞免疫

此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結(jié)合域RBD，有利于進(jìn)入靶細(xì)胞，從而激發(fā)細(xì)胞免疫

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