尖孢鐮刀菌會(huì)引起黃瓜枯萎病的發(fā)生。研究人員從土壤中分離篩選出對(duì)黃瓜枯萎病有抑制效果的拮抗細(xì)菌（jb9菌株），為黃瓜枯萎病提供生物防治。實(shí)驗(yàn)過程如圖1所示，回答下列問題：

（1）將土壤樣品制成懸浮液，步驟Ⅰ使用的接種方法是

平板劃線法

平板劃線法

，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是

無菌操作

無菌操作

。培養(yǎng)基a必備的營養(yǎng)物質(zhì)有

碳源、氮源、水和無機(jī)鹽

碳源、氮源、水和無機(jī)鹽

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（2）為驗(yàn)證jb9菌株的抑菌效果，需要先將尖孢鐮刀菌均勻接種在培養(yǎng)基b表面，濾紙組作為對(duì)照組，用

無菌水

無菌水

處理濾紙。
（3）Jb9菌株能合成分泌真菌細(xì)胞壁降解酶（HCD），抑制尖孢鐮刀菌（真菌）的生長?？蒲腥藛T將獲取的HCD基因?qū)朦S瓜細(xì)胞，培育抗枯萎病的轉(zhuǎn)基因植株。圖2所示：含HCD基因的DNA片段、質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及限制酶切割位點(diǎn)。

①根據(jù)題意，將HCD基因與圖示的質(zhì)粒重組，應(yīng)選用的限制酶是

BamHⅠ和HindⅢ

BamHⅠ和HindⅢ

。在篩選培養(yǎng)基上，要加入

氨芐青霉素

氨芐青霉素

來篩選含有HCD基因的受體細(xì)胞。將受體細(xì)胞培育后獲得轉(zhuǎn)基因植株。
②檢測(cè)HCD基因是否成功表達(dá)出真菌細(xì)胞壁降解酶（HCD）的方法技術(shù)是

用尖孢鐮刀菌感染轉(zhuǎn)HCD基因的植株，觀察其抗病情況

用尖孢鐮刀菌感染轉(zhuǎn)HCD基因的植株，觀察其抗病情況

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