如圖表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列,如圖表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ四種限制性核酸內(nèi)切酶,它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。
(1)限制性核酸內(nèi)切酶切斷的化學(xué)鍵所處的具體部位是 一條鏈上相鄰兩個(gè)核苷酸的磷酸基團(tuán)與脫氧核糖之間一條鏈上相鄰兩個(gè)核苷酸的磷酸基團(tuán)與脫氧核糖之間。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割左圖所示DNA片段,其產(chǎn)物長(zhǎng)度為537bp、661bp和 790790bp。
(3)若左圖中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換,那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出下圖及其對(duì)應(yīng)的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,產(chǎn)物中共有 44種不同長(zhǎng)度的DNA片段。
(4)若將右圖中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同一種限制酶處理后進(jìn)行連接,形成重組質(zhì)粒,那么應(yīng)選用的限制酶是 BamHⅠBamHⅠ,理由是 MspⅠ和SmaⅠ會(huì)破壞目的基因,MboⅠ會(huì)將質(zhì)粒上的兩個(gè)標(biāo)記基因全破壞,BamHⅠ在目的基因兩端和質(zhì)??股谹抗性基因上有識(shí)別序列,既能形成重組質(zhì)粒,又因破壞2個(gè)標(biāo)記基因中的一個(gè)利于篩選MspⅠ和SmaⅠ會(huì)破壞目的基因,MboⅠ會(huì)將質(zhì)粒上的兩個(gè)標(biāo)記基因全破壞,BamHⅠ在目的基因兩端和質(zhì)??股谹抗性基因上有識(shí)別序列,既能形成重組質(zhì)粒,又因破壞2個(gè)標(biāo)記基因中的一個(gè)利于篩選。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】一條鏈上相鄰兩個(gè)核苷酸的磷酸基團(tuán)與脫氧核糖之間;790;4;BamHⅠ;MspⅠ和SmaⅠ會(huì)破壞目的基因,MboⅠ會(huì)將質(zhì)粒上的兩個(gè)標(biāo)記基因全破壞,BamHⅠ在目的基因兩端和質(zhì)??股谹抗性基因上有識(shí)別序列,既能形成重組質(zhì)粒,又因破壞2個(gè)標(biāo)記基因中的一個(gè)利于篩選
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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