Cre/loxP重組酶系統(tǒng)是對轉(zhuǎn)基因受體細胞DNA上的特定序列進行定點切割和重新連接，從而在基因或染色體水平上對生物基因進行遺傳改造的一種技術(shù)。其原理是重組酶Cre能識別loxP位點（特定的DNA序列），并使loxP位點間的基因序列被重組或刪除。受此啟發(fā)，科學家在檢測抗蟲基因成功導(dǎo)入煙草細胞后，嘗試用Cre/loxP重組酶系統(tǒng)刪除轉(zhuǎn)基因煙草細胞內(nèi)的抗除草劑基因，其技術(shù)過程如圖2（其中■表示啟動子）。
（1）通過基因改造獲得抗蟲煙草過程中，為大量獲得抗蟲基因，可選擇圖1中引物II、IIIII、III（用圖中羅馬數(shù)字表示）組合進行PCR擴增；擴增時，為確?？瓜x基因和表達載體充分連接，常在基因上、下游引物的5'5'端添加不同的限制酶切位點，其目的是減少DNA自連，使抗蟲基因能定向插入表達載體減少DNA自連，使抗蟲基因能定向插入表達載體。
（2）loxP是一種含34個堿基對的小型DNA片段，由一個不對稱的間隔區(qū)和兩個反向重復(fù)序列組成。Cre酶能特異性地識別反向重復(fù)序列并于特定位置切開磷酸二酯鍵，類似于基因工程中的限制限制酶，從遺傳學角度分析，Cre酶改變質(zhì)粒的原理是基因重組基因重組。
（3）通常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法把攜帶抗蟲基因的重組質(zhì)粒甲導(dǎo)入煙草細胞，經(jīng)檢測導(dǎo)入成功后，抗除草劑基因即失去用途，繼續(xù)留在煙草體內(nèi)可能會引發(fā)的生物環(huán)境安全問題是抗除草劑基因可能轉(zhuǎn)移到雜草中，造成基因污染抗除草劑基因可能轉(zhuǎn)移到雜草中，造成基因污染。
（4）經(jīng)Cre酶處理后，質(zhì)粒中的兩個loxP序列分別被切開，得到圖2右側(cè)的兩個環(huán)狀DNA分子。由于質(zhì)粒乙的抗除草劑基因前沒有啟動子質(zhì)粒乙的抗除草劑基因前沒有啟動子，抗除草劑基因不再表達，之后會在培養(yǎng)過程中消失。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】II、III；5'；減少DNA自連，使抗蟲基因能定向插入表達載體；限制；基因重組；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化；抗除草劑基因可能轉(zhuǎn)移到雜草中，造成基因污染；質(zhì)粒乙的抗除草劑基因前沒有啟動子
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：53引用：2難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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