噬菌體展示技術(shù)是將外源目標(biāo)基因插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置,使目標(biāo)蛋白被展示到噬菌體表面的生物技術(shù)(如圖所示)。被展示的蛋白質(zhì)可以保持相對獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性,以利于靶分子的識別和結(jié)合。請分析回答:
(1)插入載體之前,目標(biāo)基因一般需經(jīng)PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增基因的原理是
DNA的半保留復(fù)制
DNA的半保留復(fù)制
。若目標(biāo)基因的核苷酸序列未知,但已知其臨近區(qū)域的上、下游的部分序列如下所示,請從表中所列引物中選出一對合適的引物用于目標(biāo)基因的PCR擴(kuò)增:乙和C
乙和C
。
5′-GACGCATTACGGTAAC??????TCCAGCTTAGCAGTAA-3′
3′-CTGCGTAATGCCATTG??????AGGTCGAATCGTCATT-5′
引物Ⅰ |
引物Ⅱ |
甲 |
5′-CTGCGTAATGCCATTG |
A |
5′-AGGTCGAATCGTCATT |
乙 |
5′-GACGCATTACGGTAAC |
B |
5′-TCCAGCTTAGCAGTAA |
丙 |
5′-GTTACCGTAATGCGTC |
C |
5′-TTACTGCTAAGCTGGA |
丁 |
5′-CAATGGCATTACGCAG |
D |
5′-AATGACGATTCGACCT |
(2)目標(biāo)基因能夠與噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因拼接成功,其結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是
它們的基本組成單位都是脫氧核苷酸,且都具有雙鏈(雙螺旋)結(jié)構(gòu)
它們的基本組成單位都是脫氧核苷酸,且都具有雙鏈(雙螺旋)結(jié)構(gòu)
;建立噬菌體展示庫需用的工具酶有
限制酶和DNA連接酶
限制酶和DNA連接酶
。
(3)目標(biāo)蛋白的篩選利用了
抗原—抗體雜交
抗原—抗體雜交
方法,其原理是
抗體的結(jié)合具有特異性
抗體的結(jié)合具有特異性
。
(4)擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí),進(jìn)行誘變處理的目的可能是通過提高某些基因的突變率而獲取
具有更強(qiáng)生產(chǎn)目標(biāo)蛋白能力的噬菌體
具有更強(qiáng)生產(chǎn)目標(biāo)蛋白能力的噬菌體
;根據(jù)噬菌體的特征,擴(kuò)大培養(yǎng)體系中必須含有
宿主細(xì)胞
宿主細(xì)胞
,噬菌體才能繁殖。多次篩選后,
目標(biāo)基因高效表達(dá)
目標(biāo)基因高效表達(dá)
的噬菌體得到高度富集。