塑料制品方便人們生活的同時(shí)，也造成了短時(shí)期難以降解的“白色污染“。研究人員欲比較大腸桿菌YT1和芽孢桿菌YP1兩類細(xì)菌降解塑料（主要成分為聚氯乙烯（PVC）、聚乙烯（PE）和聚丙烯（PP）等，兩類細(xì)菌主要降解PE）的能力，并通過基因工程拼接黃粉蟲腸道內(nèi)菌株WZ的降解PVC的胞外酶基因A，培育降解塑料的“超級(jí)菌”。
（1）菌株的篩選。配制固體培養(yǎng)基，接種菌株后表層覆蓋0.1mm厚度的PE塑料。分組實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示：
| 培養(yǎng)基及接種菌株 | 培養(yǎng)基1 | 培養(yǎng)基2 | 培養(yǎng)基3 |
| 單獨(dú)培養(yǎng)并接種YT1 | 單獨(dú)培養(yǎng)并接種YP1 | 混合培養(yǎng)YT1和YP1后，選取YP1接種 | |
| 降解圈（直徑D/mm） | 3.5 | 1.8 | 4.2 |
PE塑料
PE塑料
為唯一碳源的培養(yǎng)基，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于 選擇培養(yǎng)基
選擇培養(yǎng)基
。②篩選分解PE塑料能力強(qiáng)的菌株不能直接以降解圈的大小為指標(biāo)，其原因是
因?yàn)榫w繁殖力不同，形成的菌落大小不同
因?yàn)榫w繁殖力不同，形成的菌落大小不同
。培養(yǎng)基3中接種混合培養(yǎng)后的YP1，其降解圈直徑明顯加大，其原因可能是 YP1和YT1混合培養(yǎng)過程中，YP1菌株整合了YT1的對(duì)PE塑料高分解力的基因，發(fā)生了轉(zhuǎn)化
YP1和YT1混合培養(yǎng)過程中，YP1菌株整合了YT1的對(duì)PE塑料高分解力的基因，發(fā)生了轉(zhuǎn)化
。（2）培育“超級(jí)菌”。對(duì)菌株WZ的A基因測(cè)序可知，如果在其調(diào)節(jié)功能區(qū)增加一個(gè)堿基對(duì)A/T，則可以大大增強(qiáng)其基因表達(dá)能力。通過經(jīng)典的大引物PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)在體外改造A基因，操作過程如圖1。然后與圖2所示的質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)載體，培育“超級(jí)菌“。
①利用大引物PCR進(jìn)行定點(diǎn)誘變需要進(jìn)行兩輪PCR（PCR和PCRa），在PCR，中獲得的大引物是指
以誘變引物延伸得到的DNA鏈為模板，引物1與之結(jié)合延伸得到的DNA子鏈
以誘變引物延伸得到的DNA鏈為模板，引物1與之結(jié)合延伸得到的DNA子鏈
，至少需要 4
4
個(gè)PCR循環(huán)才能獲得完整的改良A基因。②構(gòu)建改良基因表達(dá)載體時(shí)，為實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒和改良基因的準(zhǔn)確連接，應(yīng)選用的限制酶是
XmaⅠ和BglⅡ
XmaⅠ和BglⅡ
。表達(dá)載體導(dǎo)入受體菌株時(shí)，有的質(zhì)粒含有改良的A基因，有的質(zhì)粒為空白質(zhì)粒。在含氨芐青霉素和β-半乳糖苷的平板上培養(yǎng)一段時(shí)間后，其中白色菌落含有重組質(zhì)粒，判斷的依據(jù)是 含有改良基因A的重組質(zhì)粒不含有完整的LacZ基因，受體菌不能分泌分解β-半乳糖苷而使培養(yǎng)基變藍(lán)的酶
含有改良基因A的重組質(zhì)粒不含有完整的LacZ基因，受體菌不能分泌分解β-半乳糖苷而使培養(yǎng)基變藍(lán)的酶
。【答案】PE塑料；選擇培養(yǎng)基；因?yàn)榫w繁殖力不同，形成的菌落大小不同；YP1和YT1混合培養(yǎng)過程中，YP1菌株整合了YT1的對(duì)PE塑料高分解力的基因，發(fā)生了轉(zhuǎn)化；以誘變引物延伸得到的DNA鏈為模板，引物1與之結(jié)合延伸得到的DNA子鏈；4；XmaⅠ和BglⅡ；含有改良基因A的重組質(zhì)粒不含有完整的LacZ基因，受體菌不能分泌分解β-半乳糖苷而使培養(yǎng)基變藍(lán)的酶
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：23引用：1難度：0.5
相似題
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1．回答下列關(guān)于微生物的問題．
阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過程．
（1）為獲得單菌落，可采用平板劃線法或法將初篩菌液接種在培養(yǎng)基上．46SM01菌落為粉白色，初期呈突起絮狀，在顯微鏡下觀察到，菌絲白色致密，且有分生孢子，細(xì)胞核直徑約1μm,初步推測(cè)為真菌，則其特征中，最能說明SM01是真菌的是有細(xì)胞核，且有分生孢子．SM01還一定具有的結(jié)構(gòu)有（多選）．
A．細(xì)胞膜 B．核糖體 C．?dāng)M核 D．莢膜
（2）表中培養(yǎng)液pH均為6.0，若對(duì)SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進(jìn)行測(cè)定，則應(yīng)選用表中的培養(yǎng)液，針對(duì)不選用的其他培養(yǎng)液，分別說明原因：
①缺少，SM01不能很好生長(zhǎng)
②具有，會(huì)影響對(duì)SM01自身產(chǎn)生的酶活力的測(cè)定結(jié)果
③缺乏，會(huì)影響SM01的生長(zhǎng)，也無法對(duì)阿拉伯膠酶活力進(jìn)行測(cè)定．
表 試驗(yàn)用培養(yǎng)液配方培養(yǎng)液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發(fā)布：2025/1/2 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.5 -
2．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應(yīng)用的除草劑，能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生長(zhǎng)。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株，并對(duì)其計(jì)數(shù)（如圖所示），以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7 -
3．為了防治大氣污染，煙氣脫硫是環(huán)保領(lǐng)域迫切需要解決的問題．研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌，并了解其生長(zhǎng)規(guī)律，進(jìn)行了如下操作．請(qǐng)回答下列問題：
（1）采樣與細(xì)菌的篩選：在某熱電廠煙囪周圍區(qū)域要盡量做到采集土樣．為確保能夠從樣品中分離到所需要的煙氣脫硫細(xì)菌，可以通過增加脫硫菌的濃度．
（2）馴化脫硫細(xì)菌：將篩選出的脫硫細(xì)菌接種于有少量無菌水的三角瓶中，邊攪拌邊持續(xù)通入SO2氣體幾分鐘，然后接種到培養(yǎng)基上，待長(zhǎng)出菌落后再重復(fù)上述步驟，并逐步延長(zhǎng)通SO2的時(shí)間，同時(shí)逐步降低培養(yǎng)基的pH．此操作的目的是分離出的脫硫細(xì)菌．
（3）培養(yǎng)與觀察：一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間），馴化后的脫硫細(xì)菌表現(xiàn)出穩(wěn)定的特征．用高倍顯微鏡（填“可以”或“不可以”）觀察到脫硫細(xì)菌的核糖體．
（4）探究生長(zhǎng)規(guī)律：在計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)方法有稀釋涂布平板法和直接計(jì)數(shù)法．在用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的；通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌，通常推測(cè)統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目．發(fā)布：2025/1/1 8:0:2組卷：6引用：2難度：0.5
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