VNN1基因（1542bp）與炎癥相關(guān)性疾病有關(guān)，GFP基因（4735bp）控制綠色熒光蛋白的合成，該蛋白可在相應(yīng)波長的紫外光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光。某研究小組進(jìn)行鼠源GFP-VNN1重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其功能研究，回答下列問題：
（1）為構(gòu)建重組質(zhì)粒，研究小組從數(shù)據(jù)庫查找到VNNl的DNA序列，并設(shè)計引物。上游引物：5'-AAGCTTCCGCTGCACCATGACTACTC-3'（下劃線為HindⅢ酶切位點(diǎn)），下游引物：5'-GGATCCGCTCGAGCTACCAACTTAATGA-3'（下劃線為BamH I酶切位點(diǎn)），之后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR的原理是

DNA雙鏈復(fù)制

DNA雙鏈復(fù)制

。擴(kuò)增后的VNN1基因要與含GFP基因的載體連接，需用

HindⅢ酶和BamHⅠ酶

HindⅢ酶和BamHⅠ酶

（填具體酶）切割VNN1基因和含GFP基因的載體，再用

DNA連接酶

DNA連接酶

 酶處理，構(gòu)建重組質(zhì)粒。
（2）GFP基因在重組質(zhì)粒中可作為

標(biāo)記基因

標(biāo)記基因

，其作用是

鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含目的基因的細(xì)胞篩選出來

鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含目的基因的細(xì)胞篩選出來

。用之前相同的限制酶對GFP-VNN1重組質(zhì)粒切割后，進(jìn)行電泳鑒定時得到如圖1所示的部分條帶，結(jié)果表明

VNN1基因已經(jīng)插入到含GFP基因的載體中

VNN1基因已經(jīng)插入到含GFP基因的載體中

。

（3）IL-6為體內(nèi)重要的炎癥因子，能與相應(yīng)的受體結(jié)合，激活炎癥反應(yīng)。圖2為GFP-VNN1重組質(zhì)粒對細(xì)胞分泌IL-6的影響，由此說明

VNN1基因表達(dá)產(chǎn)物能促進(jìn)細(xì)胞分泌炎癥因子IL-6

VNN1基因表達(dá)產(chǎn)物能促進(jìn)細(xì)胞分泌炎癥因子IL-6

，同時發(fā)現(xiàn)與正常組比較，空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組IL-6的表達(dá)有輕微升高，造成這種現(xiàn)象的可能原因是

操作過程中對細(xì)胞的損傷（或用到化學(xué)試劑對細(xì)胞具有一定的毒性作用），可以激活相應(yīng)細(xì)胞分泌炎癥因子IL-6

操作過程中對細(xì)胞的損傷（或用到化學(xué)試劑對細(xì)胞具有一定的毒性作用），可以激活相應(yīng)細(xì)胞分泌炎癥因子IL-6

。