將微生物接種在只缺少某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,再將所缺的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)點(diǎn)植于平板上,該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)便逐漸擴(kuò)散于植點(diǎn)周圍。該微生物若需要此種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),便在這種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)擴(kuò)散處生長(zhǎng)繁殖,形成肉眼可見(jiàn)的菌落圈,這種測(cè)定微生物營(yíng)養(yǎng)需求的方法稱為生長(zhǎng)譜法。某興趣小組嘗試用生長(zhǎng)譜法測(cè)定某種大腸桿菌對(duì)糖類(碳源)的需求情況,操作流程如下:
Ⅰ.培養(yǎng)基的制備。該小組所用無(wú)碳培養(yǎng)基配方如表(加水定容至1L):
成分 |
NaCl |
KH2PO4 |
K2HPO4 |
(HN4)2SO4 |
MgSO4?7H2O |
瓊脂 |
質(zhì)量/g |
1 |
0.5 |
0.5 |
2 |
0.2 |
20 |
同時(shí)配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖溶液各50mL
Ⅱ.將大腸桿菌懸液與溶化并冷卻至50℃的固體培養(yǎng)基混勻,倒平板。
Ⅲ.將已凝固的平板背面用記號(hào)筆劃分為四個(gè)區(qū),并注明要點(diǎn)植的糖類名稱。
V.通過(guò)無(wú)菌操作分別加入蘸有不同糖類的無(wú)菌濾紙片,待平板吸收干燥后倒置培養(yǎng)24小時(shí)。
結(jié)合所學(xué)知識(shí),回答下列問(wèn)題:
(1)無(wú)碳培養(yǎng)基配方中加入(NH
4)
2SO
4的目的是
提供氮源
提供氮源
。對(duì)培養(yǎng)基及糖溶液通常采用的滅菌方法是
高壓蒸汽滅菌法
高壓蒸汽滅菌法
。倒平板后用
稀釋涂布平板
稀釋涂布平板
法進(jìn)行接種。
(2)該小組發(fā)現(xiàn)最終在培養(yǎng)基的四個(gè)區(qū)內(nèi)均有菌落圈產(chǎn)生,但大小不同,據(jù)此得到的初步結(jié)論是
大腸桿菌可以利用四種糖類(葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖)作為碳源,但利用的程度不同
大腸桿菌可以利用四種糖類(葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖)作為碳源,但利用的程度不同
。
(3)生長(zhǎng)譜法還可用于某些營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株(失去合成某種生長(zhǎng)因子能力的菌株)的篩選和鑒定,例如大腸桿菌經(jīng)紫外線誘變處理后會(huì)產(chǎn)生一些營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變個(gè)體,現(xiàn)已純化并制備出某營(yíng)養(yǎng)缺陷型的菌懸液,但不清楚是氨基酸缺陷型、維生素缺陷型還是氨基酸-維生素缺陷型,請(qǐng)簡(jiǎn)要寫出用生長(zhǎng)譜法進(jìn)行鑒定的思路,并預(yù)期可能的結(jié)果及結(jié)論
將菌懸液與溶化并冷卻至50℃的不含氨基酸和維生素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基混勻,倒平板;將培養(yǎng)基劃分成兩個(gè)相等的區(qū)域A、B;A區(qū)點(diǎn)植氨基酸、B區(qū)點(diǎn)植維生素;在適宜溫度下培養(yǎng),觀察菌落產(chǎn)生的區(qū)域。若菌落只在A區(qū)產(chǎn)生,則為氨基酸缺陷型;若菌落只在B區(qū)產(chǎn)生,則為維生素缺陷型;若菌落產(chǎn)生在AB交界處,則為氨基酸-維生素缺陷型
將菌懸液與溶化并冷卻至50℃的不含氨基酸和維生素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基混勻,倒平板;將培養(yǎng)基劃分成兩個(gè)相等的區(qū)域A、B;A區(qū)點(diǎn)植氨基酸、B區(qū)點(diǎn)植維生素;在適宜溫度下培養(yǎng),觀察菌落產(chǎn)生的區(qū)域。若菌落只在A區(qū)產(chǎn)生,則為氨基酸缺陷型;若菌落只在B區(qū)產(chǎn)生,則為維生素缺陷型;若菌落產(chǎn)生在AB交界處,則為氨基酸-維生素缺陷型
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