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基因工程重組亞單位疫苗是預(yù)防新冠病毒感染和傳播的一種有效方案，其原理是把新冠病毒上負(fù)責(zé)“生產(chǎn)”S蛋白的那部分基因找到，構(gòu)建體外重組表達(dá)載體，導(dǎo)入到微生物體內(nèi)，“生產(chǎn)”出需要的S蛋白制成疫苗。下圖是在體外構(gòu)建病毒S蛋白重組表達(dá)載體的實(shí)驗流程及相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)?；卮鹣铝袉栴}：
限制酶 BamHI BclI Sau3AI HindIII
識別序列及切割位點(diǎn) 菁優(yōu)網(wǎng) 菁優(yōu)網(wǎng) 菁優(yōu)網(wǎng) 菁優(yōu)網(wǎng)
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（1）從患者肺部組織中分離并提取得到病毒RNA，通過
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
獲得S蛋白的cDNA，再通過
PCR
PCR
法對S蛋白的基因進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增的一般步驟是
變性→復(fù)性→延伸
變性→復(fù)性→延伸
。
（2）用圖1中的質(zhì)粒X和圖2中的S蛋白基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用
BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
兩種限制酶切割，切割后通過
DNA連接
DNA連接
酶作用獲得重組質(zhì)粒。
（3）轉(zhuǎn)化前，用含
Ca2+（CaCl2）
Ca2+（CaCl2）
的溶液處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。轉(zhuǎn)化后，將大腸桿菌置于含
四環(huán)素
四環(huán)素
的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，方便篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌。為進(jìn)一步鑒定篩選出的大腸桿菌是否導(dǎo)入S蛋白基因，可用引物
甲、丙
甲、丙
進(jìn)行擴(kuò)增驗證。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；PCR；變性→復(fù)性→延伸；BclⅠ和HindⅢ；DNA連接；Ca2+（CaCl2）；四環(huán)素；甲、丙
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.7
相似題

  • 菁優(yōu)網(wǎng)1．圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列?；卮鹣铝袉栴}。
    表1
    pU702pZHZ8
    BglI5.7kb6.7kb
    表2
    固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） 0 1 2 5 10
    不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 +++++ +++ + - -
    +表示生長；-表示不生長。
    （1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的
     
    斷裂，切割形成的末端有
     
    兩種。
    （2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進(jìn)行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
     
    kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點(diǎn)的理由是
     
    。
    （3）導(dǎo)入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下可以促進(jìn)鏈霉菌完成
     
    過程。
    （4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細(xì)胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在
     
    μg/mL以上，挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
     
    。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細(xì)胞的
     
    （填“DNA”或“RNA”），檢測方法應(yīng)采用
     
    技術(shù)。

    發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

  • 2．運(yùn)用現(xiàn)代生物技術(shù)的育種方法，將抗菜青蟲的Bt基因轉(zhuǎn)移到優(yōu)質(zhì)油菜中，培育出轉(zhuǎn)基因抗蟲的油菜品種，這一品種在生長過程中能產(chǎn)生特異的殺蟲蛋白質(zhì)，對菜青蟲有顯著抗性，能大大減輕菜青蟲對油菜的危害，提高油菜產(chǎn)量，減少農(nóng)藥使用，據(jù)以上信息，下列敘述正確的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/7 11:0:1組卷：104引用：32難度：0.7

  • 3．在碳反應(yīng)中，RuBP羧化酶（R酶）可以催化CO2的固定，R酶由大亞基蛋白（L）和小亞基蛋白（S）組成。高等植物細(xì)胞中L由葉綠體基因編碼并在葉綠體中合成，S由細(xì)胞核基因編碼并在細(xì)胞溶膠中的核糖體合成后進(jìn)入葉綠體，與L組裝成有功能的酶。研究發(fā)現(xiàn)，原核生物藍(lán)藻（藍(lán)細(xì)菌）R酶的活性高于高等植物。研究人員將藍(lán)藻S、L基因轉(zhuǎn)入某高等植物（甲）的葉綠體DNA中，同時去除甲的L基因。轉(zhuǎn)基因植株能夠存活生長。檢測結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因植株中的R酶活性高于未轉(zhuǎn)基因的正常植株。下列有關(guān)敘述正確的是（　　）

    發(fā)布：2024/11/7 8:0:2組卷：5引用：1難度：0.5
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