圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列?；卮鹣铝袉栴}。
表1
| pU702pZHZ8 |
| BglI5.7kb6.7kb |
| 固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） | 0 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 | +++++ | +++ | + | - | - |
（1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
斷裂，切割形成的末端有 黏性末端和平末端
黏性末端和平末端
兩種。（2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
1.4
1.4
kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是 pIJ702上的原有BglII位點被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8，仍能被BglII切割成一條線段
pIJ702上的原有BglII位點被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8，仍能被BglII切割成一條線段
。（3）導(dǎo)入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成
轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化
過程。（4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在
5
5
μg/mL以上，挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是 根據(jù)導(dǎo)入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選
根據(jù)導(dǎo)入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選
。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細胞的 RNA
RNA
（填“DNA”或“RNA”），檢測方法應(yīng)采用 分子雜交
分子雜交
技術(shù)。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】磷酸二酯鍵；黏性末端和平末端；1.4；pIJ702上的原有BglII位點被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8，仍能被BglII切割成一條線段；轉(zhuǎn)化；5；根據(jù)導(dǎo)入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選；RNA；分子雜交
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6
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