黃曲霉素是黃曲霉菌等霉菌產(chǎn)生的對人和動物具有劇毒、強致癌的一類代謝產(chǎn)物,包括AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1等幾種。其中AFB1是對玉米和花生造成污染最嚴重的黃曲霉素。通過制備單克隆抗體可明顯提高對玉米等糧食中黃曲霉素檢測的靈敏度和特異性。
(1)AFB1進入細胞后能與tRNA結(jié)合形成復合物,抑制tRNA與某些氨基酸結(jié)合,從而干擾基因表達的
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過程。AFB1能特異性誘發(fā)人肝細胞中抑癌基因p53發(fā)生堿基對替換,從而使該基因發(fā)生 突變
突變
,誘發(fā)肝癌。
(2)以下是抗AFB1的單克隆抗體的簡要制備思路。
①AFB1屬于小分子物質(zhì),不具有刺激機體產(chǎn)生抗體的免疫原性,制備時需要將AFB1與某些物質(zhì)結(jié)合成具有免疫原性的完全抗原。下列物質(zhì)中不能參與合成完全抗原的是 c、d、e
c、d、e
。
a.牛血清白蛋白b.卵清蛋白 c.丙氨酸d.葡萄糖 e.香豆素
②將經(jīng)完全抗原AFB1-BSA(BSA是牛血清白蛋白)免疫的小鼠的脾臟細胞與骨髓瘤細胞通過融合,經(jīng)選擇培養(yǎng)基篩選和檢測等過程,最終選擇出 抗體檢測呈陽性的雜交瘤(能產(chǎn)生抗AFB1抗體的雜交瘤)
抗體檢測呈陽性的雜交瘤(能產(chǎn)生抗AFB1抗體的雜交瘤)
細胞進行培養(yǎng),從培養(yǎng)液中分離提純得到抗AFB1的抗體。
③利用抗原—抗體雜交技術(shù)對抗AFB1抗體進行特異性和靈敏度鑒定。下表是三種抗AFBI抗體的交叉反應鑒定結(jié)果。
被測黃曲霉素 |
AFB1 |
AFB2 |
AFG1 |
AFG2 |
AFM1 |
2A11交叉反應率(%) |
100 |
17.1 |
0.56 |
0.37 |
未檢測到 |
3A12交叉反應率(%) |
100 |
7.8 |
20.2 |
0.6 |
<0.1 |
3G1交叉反應率(%) |
100 |
6.4 |
<0.1 |
<0.1 |
未檢測到 |
注:交叉反應率表示抗體和抗原或抗原類似物的結(jié)合程度
I.上述實驗結(jié)果中,3種抗AFB
1抗體與除AFB
1外的其他黃曲霉素均能發(fā)生一定的反應,原因是
AFB1與其他黃曲霉素在結(jié)構(gòu)上有相似性
AFB1與其他黃曲霉素在結(jié)構(gòu)上有相似性
。
Ⅱ.根據(jù)交叉反應結(jié)果,應選用能產(chǎn)生
3G1
3G1
抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng)以獲得大量的該抗體用于檢測。
(3)香豆素(C
9H
6O
2)是一種對人畜低毒的AFB
1結(jié)構(gòu)類似物。玉米種植土壤中存在利用胞外酶降解AFB
1的多種微生物?,F(xiàn)要對已污染的玉來樣品進行AFB
1的微生物脫毒處理,請設計一個安全,有效的生物處理方案。