大芻草具有較強(qiáng)的耐鹽堿能力,該性狀與M蛋白有關(guān)??茖W(xué)家通過(guò)PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增M蛋白基因(如圖1)。將獲得的大量M蛋白基因與質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體,各部分結(jié)構(gòu)如圖2所示。
(1)PCR一般可分為
變性、復(fù)性、延伸
變性、復(fù)性、延伸
三步。據(jù)圖1分析,PCR過(guò)程應(yīng)選擇的引物是 Ⅱ、Ⅲ
Ⅱ、Ⅲ
,引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開(kāi)始連接脫氧核苷酸
使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開(kāi)始連接脫氧核苷酸
。
(2)在M蛋白基因兩端設(shè)計(jì)不同黏性末端的目的是 防止M蛋白基因自身環(huán)化,保證M蛋白基因在質(zhì)粒上正向連接
防止M蛋白基因自身環(huán)化,保證M蛋白基因在質(zhì)粒上正向連接
。質(zhì)粒中氨芐青霉素抗性基因的作用是 便于重組DNA分子的篩選
便于重組DNA分子的篩選
。
(3)為實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒和M蛋白基因的高效連接,切割質(zhì)粒時(shí)選用限制酶XmaⅠ而不選用限制酶SmaⅠ的原因是 XmaⅠ酶切出的黏性末端與M蛋白基因黏性末端相同,SmaⅠ的酶切末端為平末端,無(wú)法與M蛋白基因的黏性末端連接
XmaⅠ酶切出的黏性末端與M蛋白基因黏性末端相同,SmaⅠ的酶切末端為平末端,無(wú)法與M蛋白基因的黏性末端連接
。為將M蛋白基因連接到質(zhì)粒上,還需要等酶 BglⅡ、DNA連接酶
BglⅡ、DNA連接酶
。