經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
（1）通過上述基因工程技術獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是 ②⑤④①③②⑤④①③（填寫下列編號）。
①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
②選用合適的方法獲取目的基因
③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
④目的基因導入受體細胞
⑤目的基因和運載體重組構建表達載體
（2）在PCR過程中，引物的功能是 ABAB。
A．啟動DNA復制
B．規(guī)定擴增區(qū)間
C．解旋DNA雙鏈
D．充當復制模板
（3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設計的PCR引物應為圖甲中的 BCBC。
（4）獲取目的基因后，需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質(zhì)是 DNADNA（填DNA或RNA/DNA或RNA）。
（5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的 AA。
（6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用 KpnIKpnI和 XmaIXmaI切開，才能與MCO片段高效連接。
（7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是 ACAC。
A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
D．將Ap抗性克隆轉移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】②⑤④①③；AB；BC；DNA；A；KpnI；XmaI；AC
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：30引用：3難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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