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經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達(dá)。
（1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
②⑤④①③
②⑤④①③
（填寫下列編號）。
①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
②選用合適的方法獲取目的基因
③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標(biāo)蛋白
④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
（2）在PCR過程中，引物的功能是
AB
AB
。
A．啟動DNA復(fù)制
B．規(guī)定擴增區(qū)間
C．解旋DNA雙鏈
D．充當(dāng)復(fù)制模板
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（3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
BC
BC
。
（4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
DNA
DNA
（填DNA或RNA/DNA或RNA）。
（5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
A
A
。
（6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
KpnI
KpnI
和
XmaI
XmaI
切開，才能與MCO片段高效連接。
（7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
AC
AC
。
A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

【答案】②⑤④①③；AB；BC；DNA；A；KpnI；XmaI；AC
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
相似題

  • 1．PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），大小為0.9kb（1kb=1000堿基對），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白。請回答下列問題：
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    相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點（注：箭頭表示切割位點）
    名稱 識別序列及切割位點 名稱 識別序列及切割位點
    HindⅢ A↓AGCTT
    TTCGA↑A    		 EcoRⅠ G↓AATTC
    CTTAA↑G
    PvitⅡ CAG↓CTG
    GTC↑GAC    		 PstⅠ CTGC↓AG
    GA↑CGTC
    KpnⅠ G↓GTACC
    CCATG↑G    		 BamHⅠ G↓GATCC
    CCTAG↑G
    （1）為獲取phb2基因，提取該動物肝臟組織的總RNA經(jīng)RT-PCR獲得大量的目的基因，該過程使用到的酶有
     
    。
    （2）圖1為所用載體圖譜示意圖，圖中限制酶的識別序列及切割位點見表。為使phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列）與載體正確連接，在擴增的phb2基因兩端需添加
     
    和
     
    兩種限制酶的識別序列。雙酶切避免了目的基因與載體的
     
    連接，同時減少目的基因與目的基因、載體與載體的連接，以提高重組質(zhì)粒的比例。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時，需使用的酶是
     
    。
    （3）轉(zhuǎn)化前需用CaCl2處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于
     
    態(tài)的生理狀態(tài)，以提高轉(zhuǎn)化效率。
    （4）將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，隨機挑取菌落（分別編號為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（2）中選用的兩種限制酶進行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，結(jié)果如圖2，
     
    號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。
    （5）將純化得到的PHB2蛋白以一定濃度添加到人宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)24小時后，檢測處于細(xì)胞周期（圖3）不同時期的細(xì)胞數(shù)量，統(tǒng)計結(jié)果如圖4。分析該蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖可能的原因是：將細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期的
     
    （填“G1”或“S”或“G2/M”）期。
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    發(fā)布：2024/11/13 20:30:2組卷：22引用：3難度：0.6

  • 2．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　　）

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7

  • 3．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7
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