某科研團(tuán)隊(duì)利用小鼠篩選獲得一種針對(duì)禽流感病毒的鼠源單克隆抗體13D4。為了降低其應(yīng)用于人體治療時(shí)可能產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng)，將其改造為人-鼠嵌合抗體13D4-cAb,之后將構(gòu)建好的真核表達(dá)載體導(dǎo)入中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO 細(xì)胞）后，篩選能夠穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株，通過(guò)轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)、表達(dá)，純化后獲得大量嵌合抗體用于研究。請(qǐng)根據(jù)資料回答下列問(wèn)題：
（1）研究人員從分泌13D4單克隆抗體的

雜交瘤

雜交瘤

細(xì)胞中提取總RNA或mRNA，經(jīng)處理得到輕、重鏈抗原結(jié)合區(qū)的cDNA用于 PCR擴(kuò)增，并分別與人抗體輕、重鏈生物反應(yīng)區(qū)DNA序列拼接，構(gòu)建人-鼠嵌合抗體13D4-cAb的真核表達(dá)載體用于表達(dá)。
（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入CHO細(xì)胞后，可采用

分子雜交

分子雜交

技術(shù)檢驗(yàn)輕、重鏈基因是否成功轉(zhuǎn)錄，最后還需要通過(guò)

抗原--抗體雜交

抗原--抗體雜交

技術(shù)檢驗(yàn)?zāi)康幕蚴欠癯晒Ρ磉_(dá)并組裝出有生物學(xué)活性的嵌合抗體。
（3）應(yīng)用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)篩選獲得的細(xì)胞，需將轉(zhuǎn)瓶放入CO₂培養(yǎng)箱，以維持37℃和5% CO₂等培養(yǎng)條件，合成培養(yǎng)基中通常還需加入

血清

血清

或血漿等一些天然成分。為避免出現(xiàn)細(xì)胞的

接觸抑制

接觸抑制

現(xiàn)象，當(dāng)細(xì)胞鋪滿轉(zhuǎn)瓶?jī)?nèi)壁約80%左右時(shí)，應(yīng)當(dāng)使用

胰蛋白酶

胰蛋白酶

等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
（4）PCR反應(yīng)體系中，若一個(gè)模板DNA消耗引物分子14個(gè)，則該DNA擴(kuò)增了

3

3

輪。
（5）上述嵌合抗體的生產(chǎn)體現(xiàn)了

蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)

工程技術(shù)的應(yīng)用。