白細胞抗原基因(SLA-2基因)是重要的免疫應答基因??蒲腥藛T克隆SLA-2基因,構建該基因的表達載體,進而獲得該基因優(yōu)勢表達的豬腎上皮細胞。該實驗的主要流程如圖1(已知SLA-2基因長度為1100bp,質粒B的總長度為4445bp,其限制酶切割位點后的數字表示距復制原點的距離)。其中四種限制酶識別序列和切割位點如表,回答下列問題:
限制酶 | BclⅠ | NotⅠ | XbaⅠ | Sau3AⅠ |
識別序列及切割位點 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
DNA(半保留)復制
DNA(半保留)復制
,為了使擴增的SLA-2基因與質粒連接,需要在引物的 5'
5'
(填3或5)端加上 NotI、XbaI
NotI、XbaI
限制酶識別序列。擴增結束后,常采用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產物,檢測發(fā)現(xiàn)擴增產物中除目的基因外,還有其他不同大小片段的非目的基因,可能的原因一般有以下哪些 ①③
①③
(填序號)。①模板受到污染
②復性溫度過高
③引物太短
④延伸溫度偏低
(2)過程②將重組質粒導入大腸桿菌的目的是
擴增重組DNA分子
擴增重組DNA分子
,該過程需要用 Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌,使細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),然后將大腸桿菌涂布在含有 氨芐青霉素
氨芐青霉素
(抗生素)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。(3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質粒C后進行電泳,依據圖2,在圖2上畫出可能得到的電泳條帶,同時在右側標出DNA片段長度 。
(4)科研中,一般利用最小致死濃度(使某種細胞全部死亡的最小濃度)的嘌呤霉素溶液處理以初步篩選轉化的豬腎上皮細胞。為確定初步篩選轉化豬腎上皮細胞的最小致死嘌呤霉素濃度,科研人員利用
未轉化的豬腎上皮
未轉化的豬腎上皮
細胞進行相關實驗,結果如圖3。根據實驗結果應使用濃度為 80ug/mL
80ug/mL
的嘌呤霉素溶液初步篩選轉化的豬腎上皮細胞,理由是 80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉化的豬腎上皮細胞(沒有抗嘌呤霉素的細胞)全部死亡的最小濃度,能存活生長的即為已轉化的豬腎上皮細胞(有抗嘌呤霉素的細胞)
80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉化的豬腎上皮細胞(沒有抗嘌呤霉素的細胞)全部死亡的最小濃度,能存活生長的即為已轉化的豬腎上皮細胞(有抗嘌呤霉素的細胞)
。【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】DNA(半保留)復制;5';NotI、XbaI;①③;擴增重組DNA分子;Ca2+;氨芐青霉素;;未轉化的豬腎上皮;80ug/mL;80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉化的豬腎上皮細胞(沒有抗嘌呤霉素的細胞)全部死亡的最小濃度,能存活生長的即為已轉化的豬腎上皮細胞(有抗嘌呤霉素的細胞)
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/7/5 8:0:9組卷:8引用:2難度:0.6
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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