白細胞抗原基因(SLA-2基因)是重要的免疫應(yīng)答基因??蒲腥藛T克隆SLA-2基因,構(gòu)建該基因的表達載體,進而獲得該基因優(yōu)勢表達的豬腎上皮細胞。該實驗的主要流程如圖1(已知SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切割位點后的數(shù)字表示距復(fù)制原點的距離)。其中四種限制酶識別序列和切割位點如表,回答下列問題:
限制酶 |
BclⅠ |
NotⅠ |
XbaⅠ |
Sau3AⅠ |
識別序列及切割位點 |
T↓GATCA |
GC↓GGCCGC |
T↓CTAGA |
↓GATC |
(1)過程①中,PCR擴增SLA-2基因的原理是
DNA(半保留)復(fù)制
DNA(半保留)復(fù)制
,為了使擴增的SLA-2基因與質(zhì)粒連接,需要在引物的
5'
5'
(填3或5)端加上
NotI、XbaI
NotI、XbaI
限制酶識別序列。擴增結(jié)束后,常采用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產(chǎn)物,檢測發(fā)現(xiàn)擴增產(chǎn)物中除目的基因外,還有其他不同大小片段的非目的基因,可能的原因一般有以下哪些
①③
①③
(填序號)。
①模板受到污染
②復(fù)性溫度過高
③引物太短
④延伸溫度偏低
(2)過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是
擴增重組DNA分子
擴增重組DNA分子
,該過程需要用
Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌,使細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),然后將大腸桿菌涂布在含有
氨芐青霉素
氨芐青霉素
(抗生素)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
(3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后進行電泳,依據(jù)圖2,在圖2上畫出可能得到的電泳條帶,同時在右側(cè)標(biāo)出DNA片段長度
。
(4)科研中,一般利用最小致死濃度(使某種細胞全部死亡的最小濃度)的嘌呤霉素溶液處理以初步篩選轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細胞。為確定初步篩選轉(zhuǎn)化豬腎上皮細胞的最小致死嘌呤霉素濃度,科研人員利用
未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮
未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮
細胞進行相關(guān)實驗,結(jié)果如圖3。根據(jù)實驗結(jié)果應(yīng)使用濃度為
80ug/mL
80ug/mL
的嘌呤霉素溶液初步篩選轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細胞,理由是
80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細胞(沒有抗嘌呤霉素的細胞)全部死亡的最小濃度,能存活生長的即為已轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細胞(有抗嘌呤霉素的細胞)
80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細胞(沒有抗嘌呤霉素的細胞)全部死亡的最小濃度,能存活生長的即為已轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細胞(有抗嘌呤霉素的細胞)
。
【答案】DNA(半保留)復(fù)制;5';NotI、XbaI;①③;擴增重組DNA分子;Ca
2+;氨芐青霉素;
;未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮;80ug/mL;80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細胞(沒有抗嘌呤霉素的細胞)全部死亡的最小濃度,能存活生長的即為已轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細胞(有抗嘌呤霉素的細胞)