有研究表明CDKN2B基因與小鼠的壽命有關(guān)，科學(xué)家將該基因?qū)胄∈篌w內(nèi)，統(tǒng)計(jì)其壽命是否高于正常小鼠。圖1表示CDKN2B基因與相關(guān)限制酶酶切位點(diǎn)，該基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA堿基序列與A鏈的堿基序列相同（T、U視為相同的堿基），圖2為質(zhì)粒簡圖，請(qǐng)回答下列有關(guān)問題：

（1）科學(xué)家首先采用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。PCR-過程中有兩次升溫一次降溫，其中降溫的目的是

讓兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合

讓兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合

。
（2）科學(xué)家在構(gòu)建基因表達(dá)載體過程時(shí)，目的基因應(yīng)插在

啟動(dòng)子

啟動(dòng)子

和

終止子

終止子

之間才能正常表達(dá)。單獨(dú)使用限制酶HindⅢ分別切割目的基因和載體后產(chǎn)生黏性末端。攜帶CDKN2B基因的重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)約一半的細(xì)胞中沒有檢測到CDKN2B蛋白，原因是

部分基因反向連接

部分基因反向連接

。為了避免這種現(xiàn)象的發(fā)生，應(yīng)對(duì)以上方法進(jìn)行改進(jìn)，改進(jìn)措施為

同時(shí)用PstⅠ，EcoRI分別對(duì)目的基因和載體進(jìn)行酶切

同時(shí)用PstⅠ，EcoRI分別對(duì)目的基因和載體進(jìn)行酶切

。
（3）若想讓一個(gè)轉(zhuǎn)入了自的基因的受精卵發(fā)育成多個(gè)個(gè)體，可以采用

胚胎分割

胚胎分割

技術(shù)，操作時(shí)應(yīng)注意做到

將囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割

將囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割

。