Ⅰ型糖尿病是因免疫系統(tǒng)將自身胰島素作為抗原識(shí)別而引起的自身免疫病。小腸黏膜長(zhǎng)期少量吸收胰島素抗原，能誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)識(shí)別該抗原后應(yīng)答減弱，從而緩解癥狀?？蒲腥藛T利用Ⅰ型糖尿病模型小鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，使乳酸菌在小鼠腸道內(nèi)持續(xù)產(chǎn)生人胰島素抗原，為此構(gòu)建重組表達(dá)載體，技術(shù)路線如圖1。

據(jù)圖回答：
（1）為使人胰島素在乳酸菌中高效表達(dá)，需改造其編碼序列。圖2是改造前后人胰島素B鏈編碼序列的起始30個(gè)核苷酸序列。據(jù)圖分析，轉(zhuǎn)錄形成的mRNA中，該段序列所對(duì)應(yīng)的片段內(nèi)存在堿基替換的密碼子數(shù)有

6

6

個(gè)。
（2）在人胰島素A、B肽鏈編碼序列間引入一段短肽編碼序列，確保等比例表達(dá)A、B肽鏈。下列有關(guān)分析正確的是

ABCD

ABCD

。
A．引入短肽編碼序列不能含終止子序列
B．引入短肽編碼序列不能含終止密碼子編碼序列
C．引入短肽不能改變A鏈氨基酸序列
D．引入短肽不能改變?cè)艘葝u素抗原性
（3）在重組表達(dá)載體中，SacⅠ和XbaⅠ限制酶僅有圖示的酶切位點(diǎn)。用這兩種酶充分酶切重組表達(dá)載體，可形成

3

3

種DNA片段。質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有

①自我復(fù)制；②帶有特殊的標(biāo)記基因③具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)

①自我復(fù)制；②帶有特殊的標(biāo)記基因③具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)

（答出兩點(diǎn)即可）
（4）檢測(cè)轉(zhuǎn)化的乳酸菌發(fā)現(xiàn)，信號(hào)肽—重組人胰島素分布在細(xì)胞壁上。由此推測(cè)，信號(hào)肽的合成和運(yùn)輸所經(jīng)歷的細(xì)胞結(jié)構(gòu)依次是

核糖體、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、細(xì)胞膜、細(xì)胞壁

核糖體、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、細(xì)胞膜、細(xì)胞壁

。
（5）Ⅰ型糖尿病也可以通過(guò)核移植技術(shù)進(jìn)行治療。目前核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是

顯微操作

顯微操作

法，還有人采用梯度離心，紫外光短時(shí)間照射、化學(xué)物質(zhì)處理等方法，這些方法是在沒(méi)有刺破透明帶或卵母細(xì)胞質(zhì)膜的情況下，去除細(xì)胞核或使卵細(xì)胞核

DNA變性

DNA變性

，從而達(dá)到去核的目的。