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研究表明來源于大腸桿菌的蘇氨酸輸出蛋白（由rhtA基因編碼）能夠識別5-氨基乙酰丙酸，并將其輸出至細胞外。為探究蘇氨酸輸出蛋白對5-氨基丙酸合成的影響，研究人員從大腸桿菌的基因組DNA中擴增出rhtA基因，并構(gòu)建出相應(yīng)的重組質(zhì)粒，獲得轉(zhuǎn)rhtA基因的工程菌，其基本操作流程如圖1所示，已知引物A、B的序列分別是：5′-AGGAAACAGACCATGGAATTCATGCCTGGTTCATTACGTAAAATG-3′、5′-GCCAAGCTTGCATGCCTGCAGTTAATTAATGTCTAATTCTTTTATTTTGCTC-3′。
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回答下列問題：
（1）由圖可知，獲取大量rhtA基因要經(jīng)PCR技術(shù)擴增，若要擴增出N個rhtA基因，需要引物A、B各
N-1
N-1
個，對引物A的設(shè)計要求是
不能自身成環(huán)、不能與引物B互補配對、長度要適中
不能自身成環(huán)、不能與引物B互補配對、長度要適中
（答出2點即可）；通過過程①得到重組質(zhì)粒，需選用的兩種限制酶是
EcoRⅠ和HindⅠ
EcoRⅠ和HindⅠ
，兩者起作用部位的化學(xué)鍵是
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
。
（2）過程②⑤在操作時，一般需用鈣離子處理大腸桿菌細胞，使細胞處于一種
感受態(tài)細胞
感受態(tài)細胞
的生理狀態(tài)。過程③將大腸桿菌體內(nèi)的質(zhì)粒提取出來進行驗證時，以EeoRⅠ切割pEC-XK99E質(zhì)粒為對照，分別對重組質(zhì)粒用EcoRⅠ單酶切、以（1）選用的雙酶對重組質(zhì)粒進行雙酶切，然后用電泳技術(shù)進行驗證，其實驗結(jié)果如圖2所示，若2是對照，則3、4分別是單酶切、雙酶切的結(jié)果，做出此推測的依據(jù)是
用EcoRⅠ單酶切對照和重組質(zhì)粒，均使質(zhì)粒成為線形，2的DNA條帶略比3小，是因為3多了一段rhtA基因序列，4被雙酶切后形成兩個DNA片段，此兩段DNA的大小相加剛好與3基本相同
用EcoRⅠ單酶切對照和重組質(zhì)粒，均使質(zhì)粒成為線形，2的DNA條帶略比3小，是因為3多了一段rhtA基因序列，4被雙酶切后形成兩個DNA片段，此兩段DNA的大小相加剛好與3基本相同
。
（3）將正確的質(zhì)粒導(dǎo)入A19后，后續(xù)的步驟是
目的基因的檢測與鑒定
目的基因的檢測與鑒定
。本技術(shù)選用微生物大腸桿菌作為受體細胞，而不選用動物細胞，理由是
微生物繁殖速度快，可在短時間內(nèi)獲得大量基因表達的產(chǎn)物
微生物繁殖速度快，可在短時間內(nèi)獲得大量基因表達的產(chǎn)物
（答出一點即可）。

【答案】N-1；不能自身成環(huán)、不能與引物B互補配對、長度要適中；EcoRⅠ和HindⅠ；磷酸二酯鍵；感受態(tài)細胞；用EcoRⅠ單酶切對照和重組質(zhì)粒，均使質(zhì)粒成為線形，2的DNA條帶略比3小，是因為3多了一段rhtA基因序列，4被雙酶切后形成兩個DNA片段，此兩段DNA的大小相加剛好與3基本相同；目的基因的檢測與鑒定；微生物繁殖速度快，可在短時間內(nèi)獲得大量基因表達的產(chǎn)物
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：5難度：0.6
相似題

  • 1．科研小組利用基因工程技術(shù)將“抗蟲基因”轉(zhuǎn)入棉花細胞成功培育出抗蟲棉，該技術(shù)所用的含“抗蟲基因”的DNA與質(zhì)粒上相關(guān)限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示（不同限制酶的識別序列和酶切位點：BamHⅠ5′-G↓GATCC-3′，BclⅠ5′-T↓GATCA-3′，Sau3AⅠ5′-↓GATC-3′，HindⅢ5′-A↓AGCTT-3′）。請分析并回答以下問題：
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    （1）將抗蟲基因轉(zhuǎn)入棉花細胞前，可以通過PCR擴增獲得大量抗蟲基因，PCR擴增前應(yīng)根據(jù)
     
    設(shè)計引物。培育轉(zhuǎn)基因棉花的核心工作是
     
    。由圖1和圖2分析可知，研究人員應(yīng)選擇
     
    限制酶處理含抗蟲基因的DNA片段，在處理質(zhì)粒的時候應(yīng)選擇
     
    限制酶。
    （2）蛋白酶抑制劑基因也是一種抗蟲基因，某研究團隊將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉(zhuǎn)化，獲得轉(zhuǎn)基因植株。
    ①將抗蟲基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)時，除了采用我國科學(xué)家獨創(chuàng)的花粉管通道法，還可以采用
     
    法，使用該方法時，應(yīng)將抗蟲基因插入到質(zhì)粒的
     
    區(qū)域。
    ②標(biāo)記基因可用于檢測目的基因是否導(dǎo)入，由圖2可知，應(yīng)選含有
     
    的培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的細胞。為了檢測目的基因在受體細胞中是否穩(wěn)定表達，在分子水平上的檢測方法為
     
    。
    ③圖3為將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉(zhuǎn)化的實驗結(jié)果，據(jù)結(jié)果分析，
     
    （選填“NaPI”或“StpinlA”或“NaPI+StpinlA”）轉(zhuǎn)基因棉花的抗蟲效果最佳，得出該結(jié)論的原因是
     
    。

    發(fā)布：2024/11/19 5:30:2組卷：38引用：2難度：0.5

  • 2．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運用交錯延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項正確的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)
    注：①交錯延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細胞中特異性啟動基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細胞合成生長素。

    發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

  • 3．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7
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