馬鈴薯是重要的塊莖類糧食作物。二倍體馬鈴薯普遍存在自交不親和的現(xiàn)象,導致無法使用種子種植馬鈴薯。二倍體馬鈴薯的自交不親和是由核糖核酸酶基因(S-RNase)控制的,我國科研人員通過基因編輯技術敲除了馬鈴薯的S-RNase基因,獲得自交親和的二倍體馬鈴薯,為馬鈴薯雜交育種提供了全新的技術體系。下圖是科研人員用CRISPR/Cas9基因編輯技術定點敲除S-RNase基因的示意圖,回答下列問題:
(1)用于編輯不同基因的CRISPR/Cas9復合物中向導RNA堿基序列不同,因此首先要確定S-RNase基因中的待編輯序列,可以通過PCR技術擴增S-RNase基因,作為編碼特定向導RNA的模板。擴增時需要根據(jù) S-RNase基因的脫氧核苷酸序列S-RNase基因的脫氧核苷酸序列設計引物,引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
(2)CRISPR/Cas9系統(tǒng)能精準識別相關基因,依據(jù)的原理是向導RNA與目標DNA發(fā)生 堿基互補配對堿基互補配對;Cas9蛋白可催化 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵(填化學鍵名稱)水解,剪切特定DNA片段。
(3)欲檢測經(jīng)上述基因編輯技術得到的植株是否已具有自交親和性狀,最簡便的方法是 讓該植株自交,觀察能否產(chǎn)生種子(或觀察該植株能否自交產(chǎn)生種子)讓該植株自交,觀察能否產(chǎn)生種子(或觀察該植株能否自交產(chǎn)生種子)。
(4)實驗發(fā)現(xiàn),CRISRP/Cas9基因編輯技術有時存在編輯對象出錯而造成“脫靶”,向導RNA的序列長短影響成功率,序列越短,脫靶率越高。脫靶最可能的原因是 非基因編輯對象也可能含有與向導RNA配對的堿基序列,造成向導RNA與之結合而脫靶非基因編輯對象也可能含有與向導RNA配對的堿基序列,造成向導RNA與之結合而脫靶。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】S-RNase基因的脫氧核苷酸序列;使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸;堿基互補配對;磷酸二酯鍵;讓該植株自交,觀察能否產(chǎn)生種子(或觀察該植株能否自交產(chǎn)生種子);非基因編輯對象也可能含有與向導RNA配對的堿基序列,造成向導RNA與之結合而脫靶
【解答】
【點評】
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