人類胰島素基因位于第11號(hào)染色體上，長度8416bp,包含3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子，人類胰島素的氨基酸序列已知?；卮鹣嚓P(guān)問題：

（1）如圖是利用PCR技術(shù)獲取人胰島素基因的方法，除了此方法外，還可以利用的方法是

從基因文庫獲取或人工合成

從基因文庫獲取或人工合成

。
（2）利用PCR技術(shù)獲取人胰島素基因，在緩沖液中除了要添加模板和引物外，還需要添加的物質(zhì)有

四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）

四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）

。
（3）經(jīng)過

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輪循環(huán)可以得到所需的目的基因，一個(gè)DNA分子經(jīng)過5輪循環(huán)，需要引物A

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個(gè)，從PCR的過程和DNA分子的特點(diǎn)，試著寫出設(shè)計(jì)引物需要注意的問題

引物自身不能有互補(bǔ)序列 引物之間不能有互補(bǔ)序列、引物長度適當(dāng)、引物能與目的基因兩側(cè)特異性結(jié)合、避免與擴(kuò)增DNA內(nèi)有過多互補(bǔ)的序列

引物自身不能有互補(bǔ)序列 引物之間不能有互補(bǔ)序列、引物長度適當(dāng)、引物能與目的基因兩側(cè)特異性結(jié)合、避免與擴(kuò)增DNA內(nèi)有過多互補(bǔ)的序列

（答出2點(diǎn)即可）。
（4）利用SDS-凝膠電泳分離不同DNA分子，遷移速度取決于

DNA分子的大小

DNA分子的大小

。
（5）利用圖示方法獲取的目的基因，直接構(gòu)建基因表達(dá)載體后導(dǎo)入大腸桿菌，能不能表達(dá)出人胰島素，判斷并說明理由

不能，因?yàn)榇朔椒ǐ@得的目的基因中含有內(nèi)含子，大腸桿菌無法正常識(shí)別內(nèi)含子而對(duì)內(nèi)含子部分轉(zhuǎn)錄的mRNA進(jìn)行翻譯，導(dǎo)致合成的蛋白質(zhì)出現(xiàn)錯(cuò)誤

不能，因?yàn)榇朔椒ǐ@得的目的基因中含有內(nèi)含子，大腸桿菌無法正常識(shí)別內(nèi)含子而對(duì)內(nèi)含子部分轉(zhuǎn)錄的mRNA進(jìn)行翻譯，導(dǎo)致合成的蛋白質(zhì)出現(xiàn)錯(cuò)誤

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