Ⅰ.ALDH2是人體酒精代謝的關(guān)鍵酶，當(dāng)前人們對(duì)有效解酒保肝藥物的需求日益迫切，高效表達(dá)出ALDH2具有非常重要的意義。某研究小組將人源ALDH2基因進(jìn)行優(yōu)化后，與TPIp一同整合到酵母菌中表達(dá)，以得到合適的工程菌，以下是該工作的部分過(guò)程。
（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒
如圖1所示，人源ALDH2基因來(lái)自質(zhì)粒pUC57，需要和ALDH2基因一同整合的TPIp在質(zhì)粒M中，TPIp能讓ALDH2高效表達(dá)，由此推測(cè)TPIp是

C

C

。
A.起始密碼子
B.終止密碼子
C.強(qiáng)啟動(dòng)子
D.強(qiáng)終止子
分別用合適的限制酶酶切兩種質(zhì)粒后，電泳并回收目的基因和線性化載體，然后用DNA連接酶處理，接著將連接好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化導(dǎo)入大腸桿菌，用涂布有青霉素（抗原核生物生長(zhǎng)的抗生素，對(duì)真菌無(wú)影響；圖1質(zhì)粒上的Amp表示能抗青霉素的基因）的培養(yǎng)基平板篩選出單菌落，最后提取其中的質(zhì)粒，并用圖1中的限制酶進(jìn)行雙酶切后再進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。為了達(dá)到上述實(shí)驗(yàn)的目的，圖1右邊的4種質(zhì)粒（M-I～M-4）中，可以用的質(zhì)粒是

M-1

M-1

。

（2）基因組件TRPIL-URA3-TPIp-ALDH2-TPI-TRPIR的構(gòu)建上一步構(gòu)建的重組質(zhì)粒并不能直接轉(zhuǎn)化入酵母細(xì)胞中，因?yàn)槠渲械臉?biāo)記基因不合適，不合適的原因是

青霉素只能抑制原核細(xì)胞生長(zhǎng)，酵母菌是真菌，不能被抑制，重組質(zhì)粒是否轉(zhuǎn)化入酵母菌，酵母菌都能生長(zhǎng)，達(dá)不到篩選目的

青霉素只能抑制原核細(xì)胞生長(zhǎng)，酵母菌是真菌，不能被抑制，重組質(zhì)粒是否轉(zhuǎn)化入酵母菌，酵母菌都能生長(zhǎng)，達(dá)不到篩選目的

。
URA3是尿嘧啶合成酶基因，所以研究小組將該基因作為標(biāo)記基因，由于未找到合適的限制酶酶切，小組用融合PCR的方法構(gòu)建URA3-TPIp-ALDH2-TPIt基因組件。融合PCR的過(guò)程如圖2，若要達(dá)到融合基因構(gòu)建的目的，此過(guò)程的關(guān)鍵是引物P2和P3

末端有互補(bǔ)序列

末端有互補(bǔ)序列

。用同樣的辦法，將酵母菌的TRPI基因的部分片段融入，構(gòu)建基因組件TRPIL-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-TRPIR。融合酵母菌的TRPI基因的部分片段是為下一步同源重組做準(zhǔn)備。

（3）基因工程菌的構(gòu)建
通過(guò)同源重組的方法將上述構(gòu)建的基因組件整合到酵母菌中，在

缺乏尿嘧啶的固體

缺乏尿嘧啶的固體

培養(yǎng)基上挑出單菌落，初步表示獲得整合成功的酵母菌。同源重組的過(guò)程大致如圖3所示。

Ⅱ.某校生物興趣小組研讀教材，了解到孟德爾研究了豌豆莖的高度、子葉顏色等7對(duì)相對(duì)性狀的遺傳情況。一部分小組成員查閱資料發(fā)現(xiàn)豌豆體細(xì)胞中正好含有7對(duì)同源染色體。于是有的小組成員根據(jù)這些信息，初步認(rèn)為豌豆控制這7對(duì)相對(duì)性狀的基因分別位于7對(duì)同源染色體上。
（1）小組一部分成員再現(xiàn)了孟德爾豌豆高矮莖相對(duì)性狀的雜交實(shí)驗(yàn)。他們選取豌豆的高莖植株與矮莖植株雜交，F(xiàn)₁全為高莖，F(xiàn)₂分離比不是約3：1，而是約35：1。同學(xué)們對(duì)此作出的分析是：F₁（Dd）在發(fā)育過(guò)程中受環(huán)境因素影響，導(dǎo)致染色體數(shù)目加倍形成四倍體（DDdd），四倍體DDdd產(chǎn)生的配子種類及比例是

DD：Dd：dd=1：4：1

DD：Dd：dd=1：4：1

。受精時(shí)，雌雄配子隨機(jī)結(jié)合，F(xiàn)₂出現(xiàn)了

5

5

種基因型，從而使F₂表現(xiàn)型的比值為高莖：矮莖=35：1。為證明以上分析是否正確，可以通過(guò)測(cè)交實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定F₁的基因型，測(cè)交的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是

高莖：矮莖≈5：1

高莖：矮莖≈5：1

，才可驗(yàn)證上述分析結(jié)論。
（2）小組另一部分成員隨機(jī)選擇豌豆子葉顏色和種皮顏色這兩種性狀進(jìn)行兩對(duì)相對(duì)性狀的雜交實(shí)驗(yàn)：P→F₁→F₂。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)F₂中黃子葉灰種皮：黃子葉白種皮：綠子葉灰種皮：綠子葉白種皮約為9：3：3：1，但還是有點(diǎn)偏差。對(duì)于偏差，同學(xué)們的一種解釋是統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)存在誤差，但這兩對(duì)相對(duì)性狀仍遵循自由組合定律。另一些成員查閱資料，發(fā)現(xiàn)孟德爾研究的7對(duì)相對(duì)性狀的遺傳因子并不是分別位于7對(duì)同源染色體上，而是分布在4對(duì)同源染色體上。
根據(jù)這些信息，關(guān)于F₁比值偏離9：3：3：1的另一種解釋是：控制子葉顏色和種皮顏色的基因位于同一對(duì)同源染色體上，因這兩對(duì)基因相距

較遠(yuǎn)

較遠(yuǎn)

（填“較近”或“較遠(yuǎn)”），F(xiàn)₁在形成配子時(shí)，

它們之間發(fā)生交換的概率就越大，產(chǎn)生的四種配子的比例也越接近1：1：1：1

它們之間發(fā)生交換的概率就越大，產(chǎn)生的四種配子的比例也越接近1：1：1：1

。雌雄配子結(jié)合后，導(dǎo)致F₂出現(xiàn)四種表現(xiàn)型，且它們之間的比例大體上接近9：3：3：1。