鹽脅迫會(huì)影響植物的生長(zhǎng)，可用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高植物的耐鹽能力。mybx是響應(yīng)鹽脅迫的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其功能缺失突變體對(duì)150mmol?L-1的NaCl高度敏感。HKT1基因表達(dá)的Na+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)Na+從木質(zhì)部導(dǎo)管到木質(zhì)部薄壁細(xì)胞的運(yùn)輸，減少木質(zhì)部的Na+含量，從而提高植物的耐鹽能力?？蒲腥藛T構(gòu)建HKT1基因的表達(dá)載體獲得HKT1基因表達(dá)菌體，構(gòu)建過程如圖所示。四種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示?；卮鹣铝袉栴}：
| 限制酶 |
HindⅢ |
BamHⅠ |
XhoⅠ |
BglⅡ |
| 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) |
A↓AGCTT |
G↓GATCC |
C↓TCGAG |
A↓GATCT |
（1）將擬南芥細(xì)胞破碎提取RNA時(shí)，需要在溶液中加入
RNA酶抑制劑
RNA酶抑制劑
，以防止RNA降解。過程③要選擇合適的限制酶切割含HKT1基因的DNA片段，應(yīng)選用的表中的限制酶是
HindⅢ、XhoI
HindⅢ、XhoI
。
（2）過程⑤將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌。在篩選含有HKT1基因的大腸桿菌時(shí)，除必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還需要在培養(yǎng)基中添加
卡那霉素
卡那霉素
。提取重組質(zhì)粒A將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌，用農(nóng)桿菌侵染擬南芥mybz突變體花序，農(nóng)桿菌的作用是
攜帶HKT1基因進(jìn)入擬南芥細(xì)胞，并使HKT1基因在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)
攜帶HKT1基因進(jìn)入擬南芥細(xì)胞，并使HKT1基因在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)
。
（3）檢測(cè)轉(zhuǎn)HKT1基因擬南芥mybr突變株是否表達(dá)出Na
+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白時(shí)，可用
抗原―抗體雜交
抗原―抗體雜交
技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。若Na
+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白高度表達(dá)，還需要進(jìn)一步鑒定其抗性程度，實(shí)驗(yàn)的思路是
將轉(zhuǎn)基因突變株種植在施加了濃度為150mmol?L-1的NaCl溶液的土壤中，檢測(cè)木質(zhì)部薄壁細(xì)胞的含鹽量和植株的生長(zhǎng)狀況
將轉(zhuǎn)基因突變株種植在施加了濃度為150mmol?L-1的NaCl溶液的土壤中，檢測(cè)木質(zhì)部薄壁細(xì)胞的含鹽量和植株的生長(zhǎng)狀況
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