小立碗蘚是具有高效同源重組率的苔蘚植物，科學家利用同源重組交換的原理對小立碗蘚進行基因敲除來研究某目的基因的功能?；蚯贸^程是先構建基因敲除載體，將基因敲除載體導入受體細胞，經過篩選找出基因敲除成功的植株?；蚯贸砣鐖D所示：
注：抗生素抗性基因表達產物對卡那霉素有抗性；1、2為實現(xiàn)同源重組交換的序列，3、4、5、6為其他不同的基因片段；G-up-f、G-down-r、35sp-r、35st-f、Gene-f、Gene-r為引物；1、2序列發(fā)生同源重組，使得野生型小立碗蘚DNA上的目的基因被抗生素抗性基因替換。
（1）小立碗蘚目的基因敲除載體的受體細胞是原生質體。要制備小立碗蘚的原生質體，常用的酶是 纖維素酶和果膠酶纖維素酶和果膠酶。制備原生質體時，兩種酶應該溶解在 等于等于（填“大于”“小于”或“等于”）細胞液濃度的外界溶液中，原因是 若濃度過低原生質體會吸水漲破，若濃度過高則會失水皺縮若濃度過低原生質體會吸水漲破，若濃度過高則會失水皺縮。將構建好的目的基因敲除載體導入原生質體，然后將原生質體放在含 卡那霉素卡那霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，對能存活的植物提取基因組DNA，用引物 Gene-f、Gene-rGene-f、Gene-r進行PCR擴增30個循環(huán)后進行電泳，如果沒有目的基因條帶，則確定目的基因敲除成功。
（2）若1，2序列特異性差，則目的基因敲除載體可能會與非目的基因序列發(fā)生同源重組，造成目的基因敲除失敗。若用G-up-f、G-down-r進行擴增，不能不能（填“能”或“不能”）確定野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換，原因是 無論野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換，擴增的結果都有條帶無論野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換，擴增的結果都有條帶。
（3）動物減數(shù)分裂過程中，可能發(fā)生類似上述抗生素抗性基因替換目的基因的過程，具體時期是在 減數(shù)分裂Ⅰ前期（或四分體時期）減數(shù)分裂Ⅰ前期（或四分體時期）。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；基因工程的操作過程綜合．
【答案】纖維素酶和果膠酶；等于；若濃度過低原生質體會吸水漲破，若濃度過高則會失水皺縮；卡那霉素；Gene-f、Gene-r；不能；無論野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換，擴增的結果都有條帶；減數(shù)分裂Ⅰ前期（或四分體時期）
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有，未經書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：8引用：1難度：0.6
相似題
-
1．數(shù)字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經過次復制。第一次PCR的產物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質粒進行連接后，需先用處理農桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
把好題分享給你的好友吧~~