為探究Bcl-2相關(guān)抗凋亡蛋白3（BAG3）在細(xì)胞自噬中的作用，科研人員計(jì)劃從質(zhì)粒A中獲取BAG3基因，將其接入質(zhì)粒pGEX-4T1，然后在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)目標(biāo)蛋白，用于后續(xù)研究。請(qǐng)回答下列問題：
（1）BAG3的基因序列如圖2所示。由于BAC3基因兩側(cè)沒有合適的酶切位點(diǎn)，并確定內(nèi)部不含有EcoRI、XhoI限制酶的識(shí)別序列。在設(shè)計(jì)引物時(shí)，需將引物與限制酶的識(shí)別序列相連，以便將目的基因與載體相連。設(shè)計(jì)出的引物是 ADAD。
A．引物5'-TTGAATTCATGAGCGCCGCCACCCACTC-3'
B．引物5'-TTGAATTCTACTCGCGGCGGTGGGTGAG-3'
C．引物5'-TAGAGCTCCGGTGCTGCTGGGTTACCAC-3'
D．引物5'-TACTCGAGCGGTGCTGCTGGGTTACCAG-3'
（2）合成引物后，以 質(zhì)粒A質(zhì)粒A為模板進(jìn)行PCR，為了確認(rèn)是否擴(kuò)增出了目的基因，可對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行 電泳電泳，取出凝膠置于紫外燈下觀察照相，與DNAmarker（標(biāo)準(zhǔn)參照物）進(jìn)行對(duì)比，切下含目的基因片段的瓊脂糖凝膠，通過試劑盒回收目的基因。
（3）用雙酶切法分別處理回收的目的基因和pCEX-4TI質(zhì)粒，為了提高目的基因與表達(dá)質(zhì)粒的連接效率，需要排除 酶切后的非目標(biāo)片段酶切后的非目標(biāo)片段的干擾。
（4）用 Ca2+Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于一種能 吸收周圍環(huán)境中DNA分子吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒導(dǎo)入其中。為了篩選出工程菌，以便后期提取質(zhì)粒，檢測(cè)是否含有目的基因片段，請(qǐng)寫出工程菌的純培養(yǎng)過程。 在含有氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng)在含有氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】AD；質(zhì)粒A；電泳；酶切后的非目標(biāo)片段；Ca2+；吸收周圍環(huán)境中DNA分子；在含有氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/7/7 8:0:9組卷：36引用：5難度：0.6
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
2．煙草是我國一些地區(qū)的經(jīng)濟(jì)作物之一，提高煙草質(zhì)量有利于提高經(jīng)濟(jì)收入。我國科研團(tuán)隊(duì)研究了一種轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種，抗鹽基因的結(jié)構(gòu)和獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程（①～⑤）如圖所示。回答下列問題：
（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號(hào)）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
3．如表為5種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，如圖為某種質(zhì)粒和目的基因，箭頭所指為限制酶酶切位點(diǎn)。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中，以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是（ ）
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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