真核基因的轉錄激活因子是兩種相對獨立的蛋白質BD和AD組成的復合物，BD負責識別基因上游特定的DNA序列并與之結合（不同基因的BD不同），AD負責活化轉錄過程，兩者單獨作用時都不能啟動轉錄。在科學研究中，往往利用該原理判斷兩種蛋白質能否相互作用。具 體過程為：讓BD基因與誘餌蛋白基因融合，讓AD基因與待測蛋白基因融合，并讓它們在酵母菌中表達出相應的融合蛋白，若誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成 復合物，并啟動標記基因的表達。具體過程如圖
（1）構建重組質粒甲時使用雙酶切可以有效防止目的基因與質粒 自身環(huán)化、反向連接自身環(huán)化、反向連接；用EcoRⅠ和SalⅠ雙酶切后，檢測樣品1、2中是否含有重組質粒乙，電泳結果為圖2，其中 11號樣品為成功插入AD-待測蛋白基因的重組質粒。
（2）質粒導入前，Y2H酵母菌母液需用無菌的Ca2+處理，推測其目的是 使Y2H酵母菌細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)使Y2H酵母菌細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)。與原核細胞相比，由于酵母菌 有內質網和高爾基體對蛋白質進行加工有內質網和高爾基體對蛋白質進行加工，故蛋白質的空間構象不受影響，這也是選擇其作為受體細胞的原因之一。
（3）野生型Y2H酵母菌缺乏His3（組氨酸合成基因）和Mell（半乳糖苷酶合成基因），故可將這兩種基因作為標記基因導入Y2H酵母菌將其制備成受體菌，來判斷誘餌蛋白與待測蛋白能否相互作用。（已知在培養(yǎng)基中含有X-gal的情況下，半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈藍色）。將重組質粒甲和乙導入受體菌后，若受體菌菌落在不含組氨酸的平板上能存活且在含有X-gal 的平板上呈現(xiàn)藍色，則說明誘餌蛋白和待測蛋白能相互作用，理由是 誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復合物，并啟動兩種標記基因表達誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復合物，并啟動兩種標記基因表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】自身環(huán)化、反向連接；1；使Y2H酵母菌細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)；有內質網和高爾基體對蛋白質進行加工；誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復合物，并啟動兩種標記基因表達
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.6
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