IL-6（白細(xì)胞介素6）在體內(nèi)過(guò)量表達(dá)會(huì)引發(fā)多種免疫性疾病。在免疫療法中，利用人源IL-6抗體結(jié)合過(guò)量的IL-6進(jìn)行治療比使用鼠源IL-6單抗效果更好、風(fēng)險(xiǎn)更小?？蒲腥藛T利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將人源IL-6抗體基因轉(zhuǎn)入某種植物中并成功表達(dá)?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）將IL-6注射到小鼠體內(nèi)，取小鼠脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出

能產(chǎn)生特異性IL-6抗體的雜交瘤細(xì)胞

能產(chǎn)生特異性IL-6抗體的雜交瘤細(xì)胞

進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，可規(guī)?；a(chǎn)鼠源IL-6抗體。與人源抗體相比，前者在實(shí)際應(yīng)用中除了可能因免疫排斥導(dǎo)致效果較差外，還可能具有的潛在風(fēng)險(xiǎn)是

引起過(guò)敏反應(yīng)

引起過(guò)敏反應(yīng)

。
（2）用限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶處理人源IL-6抗體基因與

Ti質(zhì)粒

Ti質(zhì)粒

，構(gòu)建表達(dá)載體，再將其與經(jīng)

Ca²⁺

Ca²⁺

處理的農(nóng)桿菌共培養(yǎng)。培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基成分通常包括蛋白胨、酵母浸出液、無(wú)機(jī)鹽和水，其中蛋白胨可以為農(nóng)桿菌提供哪些營(yíng)養(yǎng)成分

ABD

ABD

。
A．碳源
B．氮源
C．抗生素
D．維生素
（3）利用篩選后的農(nóng)桿菌感染植物愈傷組織后，將愈傷組織置于含有抗生素的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，抗生素的作用是篩選轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織細(xì)胞及

殺滅農(nóng)桿菌

殺滅農(nóng)桿菌

。在適宜配比的激素誘導(dǎo)下，細(xì)胞不斷分裂，并經(jīng)

再分化

再分化

過(guò)程形成胚狀體，繼續(xù)發(fā)育形成試管苗。試管苗移栽到土壤前，通常需在經(jīng)

高壓蒸汽滅菌

高壓蒸汽滅菌

的珍珠巖或蛭石中進(jìn)行煉苗。
（4）利用凝膠電泳和分子雜交技術(shù)檢測(cè)人源IL-6抗體基因是否成功表達(dá)。完善以下實(shí)驗(yàn)思路：
①將幼苗葉片液氮冷凍并

研磨

研磨

，用苯酚法提取葉片總蛋白，制成樣品。
②將

凝膠

凝膠

置于緩沖溶液中，再向加樣孔中加入蛋白樣品，由于人源IL-6抗體是酸性蛋白質(zhì)，所以加樣孔應(yīng)朝向

負(fù)

負(fù)

極。
③電泳分離結(jié)束，轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，利用

抗原—抗體分子雜交

抗原—抗體分子雜交

技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。
（5）在利用植物體作為生物反應(yīng)器進(jìn)行人源IL-6抗體規(guī)?；a(chǎn)前，除對(duì)表達(dá)劑量進(jìn)行檢測(cè)外，還需要對(duì)抗體的

活性

活性

進(jìn)行檢測(cè)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因植物葉片中人源IL-6抗體表達(dá)水平較低，這與植物葉肉細(xì)胞中基因X的表達(dá)有關(guān)。可采取基因敲除技術(shù)將neo基因定向插入到基因X中，使其表達(dá)失活。在使用PCR檢測(cè)基因X是否被敲除時(shí)，至少一側(cè)的引物需要根據(jù)

neo基因

neo基因

的堿基序列設(shè)計(jì)。