為生產(chǎn)具有特定性能的α-淀粉酶，研究人員從某種海洋細(xì)菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656個(gè)堿基對(duì)），利用基因工程大量制備α-淀粉酶，實(shí)驗(yàn)流程見(jiàn)右圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增α-淀粉酶基因前，需先獲得細(xì)菌的基因組DNA基因組DNA。
（2）為了便于擴(kuò)增的DNA片段與表達(dá)載體連接，需在引物的5′5′端加上限制性酶切位點(diǎn)，且常在兩條引物上設(shè)計(jì)加入不同的限制性酶切位點(diǎn)，主要目的是使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連。使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連。。
（3）進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)的溫度和時(shí)間需根據(jù)具體情況進(jìn)行設(shè)定，下列選項(xiàng)中②②的設(shè)定引物有關(guān)，⑥⑥的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度有關(guān)。（填序號(hào)）
①變性溫度 ②退火溫度 ③延伸溫度 ④變性時(shí)間 ⑤退火時(shí)間 ⑥延伸時(shí)間
（4）下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼α-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列：
圖中虛線框內(nèi)mRNA片段包含88個(gè)密碼子，如虛線框后的序列未知，預(yù)測(cè)虛線框后的第一個(gè)密碼子最多有1313種。
（5）獲得工程菌表達(dá)的α-淀粉酶后，為探究影響酶活性的因素，以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測(cè)定酶活性，結(jié)果如下：
| 緩沖液 | 50mmol/L Na2HPO4-KH2PO4 | 50mmol/L Tris-HCl | 50mmol/L Gly-NaOH | |||||||||
| pH | 6.0 | 6.5 | 7.0 | 7.5 | 7.5 | 8.0 | 8.5 | 9.0 | 9.0 | 9.5 | 10.0 | 10.5 |
| 酶相對(duì)活性% | 25.4 | 40.2 | 49.8 | 63.2 | 70.1 | 95.5 | 99.5 | 85.3 | 68.1 | 63.7 | 41.5 | 20.8 |
pH為8.5，50mmol/LTris-HCl
pH為8.5，50mmol/LTris-HCl
。【考點(diǎn)】探究影響酶活性的條件．
【答案】基因組DNA；5′；使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連。；②；⑥；8；13；pH為8.5，50mmol/LTris-HCl
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：335引用：3難度：0.3
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1．小宇正在測(cè)試不同因素對(duì)酶活力的影響，控制實(shí)驗(yàn)組1的pH為8，實(shí)驗(yàn)組2的溫度為40℃，最后將實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪制成曲線圖（如圖）。以下能支持小宇實(shí)驗(yàn)結(jié)果的曲線圖是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 2:30:2組卷：22引用：4難度：0.6 -
2．在適宜的條件下，某實(shí)驗(yàn)小組在一定量的淀粉溶液中加入少量淀粉酶的酶促反應(yīng)速率隨反應(yīng)時(shí)間的變化如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的是（ ?。?/h2>發(fā)布：2024/12/30 19:30:2組卷：16引用：7難度：0.7 -
3．胰脂肪酶是腸道內(nèi)脂肪水解過(guò)程中的關(guān)鍵酶，板栗殼黃酮可調(diào)節(jié)胰脂肪酶活性進(jìn)而影響人體對(duì)脂肪的吸收。為研究板栗殼黃酮對(duì)胰脂肪酶活性的影響，科研人員進(jìn)行了下列實(shí)驗(yàn)。
（1）胰脂肪酶可以通過(guò)作用將食物中的脂肪水解為甘油和脂肪酸。
（2）為研究板栗殼黃酮的作用及機(jī)制，在酶量一定且環(huán)境適宜的條件下，科研人員檢測(cè)了加入板栗殼黃酮對(duì)胰脂肪酶酶促反應(yīng)速率的影響，結(jié)果如圖1。
①圖1曲線中的酶促反應(yīng)速率，可通過(guò)測(cè)量（指標(biāo)）來(lái)體現(xiàn)。
②據(jù)圖1分析，板栗殼黃酮對(duì)胰脂肪酶活性具有作用。
（3）圖2中A顯示脂肪與胰脂肪酶活性部位結(jié)構(gòu)互補(bǔ)時(shí)，胰脂肪酶才能發(fā)揮作用，因此酶的作用具有性。圖2中的B和C為板栗殼黃酮對(duì)胰脂肪酶作用的兩種推測(cè)的機(jī)理模式圖。結(jié)合圖1曲線分析，板栗殼黃酮的作用機(jī)理應(yīng)為（選填“B”或“C”）。
（4）為研究不同pH條件下板栗殼黃酮對(duì)胰脂肪酶活性的影響，科研人員進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖3所示
①本實(shí)驗(yàn)的自變量有。
②由圖3可知，板栗殼黃酮對(duì)胰脂肪酶作用效率最高的pH值約為。加入板栗殼黃酮，胰脂肪酶的最適pH變。
③若要探究板栗殼黃酮對(duì)胰脂肪酶作用的最適溫度，實(shí)驗(yàn)的基本思路是。發(fā)布：2024/12/31 2:0:1組卷：19引用：3難度：0.6
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