農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA（序列已知）可以轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入被侵染植物的染色體DNA中。研究者將圖1中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán)，并以此環(huán)為模板，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列，進(jìn)一步分析可確定T-DNA插入的具體位置。T-DNA的序列如圖2所示，虛線處省略了部分核苷酸序列。已知SalⅠ酶的識別序列為5'G↓TCGAC3'。

（1）PCR技術(shù)擴(kuò)增時(shí)起關(guān)鍵作用的酶是

Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）

Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）

，其作用是

將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端

將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端

。
（2）擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列時(shí)，需要先根據(jù)

T-DNA基因兩端已知的堿基序列

T-DNA基因兩端已知的堿基序列

設(shè)計(jì)兩種特異性引物序列，利用圖中的引物

①④

①④

組合可擴(kuò)增出T-DNA兩側(cè)的未知序列。
（3）若只使用一種引物，通過PCR技術(shù)制備與T-DNA的b鏈相同的單鏈作為某些檢測的探針，則所選擇引物由5'→3'的前5個(gè)堿基序列為

5′-CTGTC-3′

5′-CTGTC-3′

。
（4）對PCR產(chǎn)物測序，經(jīng)分析得到了圖1中的未知序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），可能正確的是

A

A

。
A．5'-TCGACCACG_____ATGTCGA-3'
B．5-AATTCCATG_____CTGAATT-3'
C．5'-GCAATGCGT_____TCGGGAA-3'
D．5'-TTGATACGC_____CGAGTAC-3'
（5）PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列后，擴(kuò)增產(chǎn)物可用

瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳

技術(shù)進(jìn)行鑒定。