棉鈴蟲和蚜蟲是常見的植物害蟲，Cry1A基因的表達產(chǎn)物對棉鈴蟲等鱗翅目昆蟲有較強的毒性，GNA基因的表達產(chǎn)物對蚜蟲等刺吸式口器的昆蟲有較強的毒性。科研人員將Cry1A基因與GNA基因連接在一起，構(gòu)建了雙抗蟲基因的重組表達載體，并轉(zhuǎn)入煙草細胞，獲得了具有雙抗性的轉(zhuǎn)基因煙草，其部分過程如圖1所示，請分析并回答以下問題：

注：Klenow能將黏性末端轉(zhuǎn)變?yōu)槠侥┒耍粓D中不同限制酶切出的黏性末端均不同。
（1）過程③將Cry1A基因與GNA基因相連，可選用

T₄DNA連接酶

T₄DNA連接酶

（“E?coliDNA連接酶”或“T₄DNA連接酶”）。
（2）過程④應(yīng)該選用

EcoRⅠ和HindⅢ

EcoRⅠ和HindⅢ

（填圖中限制酶）切割植物表達載體，以便和目的基因相連，形成重組表達載體。
（3）將重組表達載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌之前，一般先用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理農(nóng)桿菌，使其成為感受態(tài)細胞。
（4）讓農(nóng)桿菌侵染煙草葉片前，需要通過實驗篩選農(nóng)桿菌：將培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基倒平板后均分為A、B兩組，在A組培養(yǎng)基中涂布一定量的鏈霉素，在B組培養(yǎng)基中涂布等量的卡那霉素和鏈霉素。往A組培養(yǎng)基中接種適量農(nóng)桿菌，待長出菌落后，用影印法接種到B組培養(yǎng)基上，實驗結(jié)果如圖2，其中

1、3

1、3

（填圖中對應(yīng)的數(shù)字）菌落對應(yīng)的農(nóng)桿菌可能是符合要求的，即含有

重組表達載體

重組表達載體

的農(nóng)桿菌。
（5）通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)農(nóng)桿菌侵染的煙草葉片，獲得煙草幼苗。欲從個體水平檢測這些植株是否成功導入目的基因，方法是

將適量的棉鈴蟲和蚜蟲接種到轉(zhuǎn)基因植株上，觀察是否抗蟲

將適量的棉鈴蟲和蚜蟲接種到轉(zhuǎn)基因植株上，觀察是否抗蟲

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