圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒PO具有四環(huán)素抗性基因（tet^r）和氨芐青霉素抗性基因（amp^r）。請回答下列問題：

（1）用TaqDNA聚合酶進行PCR擴增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸。線性載體P₁經(jīng)酶處理，在其兩端各添加了一個

胸腺嘧啶

胸腺嘧啶

，形成線性載體P₂。
（2）為篩選出含有重組質(zhì)粒P₃的菌落，采用含有不同抗生素的平板進行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長情況如下表（“+”代表生長，“-”代表不生長）。根據(jù)表中結(jié)果判斷，應(yīng)選擇的菌落是

B

B

（填表中字母）類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別是

A類菌落含有P0、C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒

A類菌落含有P0、C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒

。

菌落類型 平板類型	A	B	C
無抗生素	+	+	+
氨芐青霉素	+	+	-
四環(huán)素	+	-	-
氨芐青霉素+四環(huán)素	+	-	-

（3）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，需設(shè)計引物進行PCR擴增，圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，PCR擴增時應(yīng)選擇的一對引物是

乙和丙

乙和丙

。小明同學(xué)用圖中某對引物從一個菌落的質(zhì)粒中擴增出了400bp片段，請分析出現(xiàn)這種結(jié)果的原因：

目的基因反向連接

目的基因反向連接

。