草甘膦是一種非選擇性除草劑,殺死雜草的同時(shí)也殺死農(nóng)作物。它與植物體內(nèi)的PEP(磷酸烯醇式丙酮酸)結(jié)構(gòu)相似,可與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶,阻止PEP轉(zhuǎn)化,影響植物細(xì)胞正常代謝而導(dǎo)致植物死亡。我國(guó)科學(xué)家從草甘膦施用土壤中的微生物體內(nèi)獲取草甘膦抗性基因GR29,并將其導(dǎo)入大豆體細(xì)胞中獲得轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆,如圖所示。回答下列問(wèn)題:
(1)圖中的GR29基因稱(chēng)為
目的基因
目的基因
,通過(guò)PCR技術(shù)可在總DNA中專(zhuān)一性的擴(kuò)增出GR29基因,原因是 PCR過(guò)程中使用的引物能與GR29基因的cDNA特異性結(jié)合
PCR過(guò)程中使用的引物能與GR29基因的cDNA特異性結(jié)合
。
(2)圖中將GR29基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上,原因是農(nóng)桿菌能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA分子轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞并整合到宿主細(xì)胞的 染色體DNA
染色體DNA
上。構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒中除圖示元件外,還必須具有啟動(dòng)子和終止子,其中啟動(dòng)子的作用是 啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別與結(jié)合的部位,它能驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別與結(jié)合的部位,它能驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
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(3)圖中的兩次篩選中,其中“篩選1”中,需在農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基中添加 四環(huán)素
四環(huán)素
,才能篩選出含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌。在“篩選2”中,為檢測(cè)GR29基因能否翻譯出相應(yīng)蛋白可采用的方法是 抗原—抗體雜交技術(shù)
抗原—抗體雜交技術(shù)
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(4)為獲得草甘膦抗性更強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因大豆,請(qǐng)嘗試對(duì)上述轉(zhuǎn)基因大豆培育過(guò)程進(jìn)行改進(jìn),寫(xiě)出你的改進(jìn)措施:用添加草甘膦的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,并可逐步增加濃度
用添加草甘膦的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,并可逐步增加濃度
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